1. આરએનએ સોલ્યુશનનું શોષણ શોધો

280, 320, 230, અને 260 nm પર શોષણ અનુક્રમે ન્યુક્લિક એસિડ, પૃષ્ઠભૂમિ (સોલ્યુશન ટર્બિડિટી), મીઠાની સાંદ્રતા અને પ્રોટીન જેવા કાર્બનિક પદાર્થોના મૂલ્યોનું પ્રતિનિધિત્વ કરે છે.સામાન્ય રીતે માત્ર OD260/OD280 (ગુણોત્તર, R) જુઓ.જ્યારે 1.8~2.0, અમે વિચારીએ છીએ કે આરએનએમાં પ્રોટીન અથવા અન્ય કાર્બનિક પદાર્થોના દૂષણને સહન કરી શકાય છે, પરંતુ એ નોંધવું જોઈએ કે જ્યારે શોષણ શોધવા માટે બફર તરીકે ટ્રિસનો ઉપયોગ કરવામાં આવે છે, ત્યારે R મૂલ્ય 2 કરતા વધારે હોઈ શકે છે (સામાન્ય રીતે તે <2.2 હોવું જોઈએ).જ્યારે R<1.8, દ્રાવણમાં પ્રોટીન અથવા અન્ય કાર્બનિક પદાર્થોનું પ્રદૂષણ વધુ સ્પષ્ટ હોય છે, અને RNA નું ભાવિ જરૂરિયાતો અનુસાર નક્કી કરી શકાય છે.જ્યારે R>2.2, તેનો અર્થ એ છે કે RNA એક ન્યુક્લિક એસિડમાં હાઇડ્રોલાઇઝ્ડ કરવામાં આવ્યું છે.
 
2.આરએનએની ઇલેક્ટ્રોફોરેટીક પેટર્ન
સામાન્ય રીતે, ડિનેચરિંગ જેલનો ઉપયોગ આરએનએ ઇલેક્ટ્રોફોરેસીસ માટે થાય છે, પરંતુ જો તે માત્ર આરએનએની ગુણવત્તા શોધવા માટે હોય, તો ડિનેચરિંગ જેલ જરૂરી નથી, અને સામાન્ય એગેરોઝ જેલનો ઉપયોગ કરી શકાય છે.ઇલેક્ટ્રોફોરેસીસનો હેતુ 28S અને 18S બેન્ડની અખંડિતતા અને તેમના ગુણોત્તર અથવા mRNA સ્મીયરની અખંડિતતાને શોધવાનો છે.સામાન્ય રીતે, જો 28S અને 18S બેન્ડ તેજસ્વી, સ્પષ્ટ અને તીક્ષ્ણ હોય (બેન્ડની કિનારીઓ સ્પષ્ટ હોય) અને 28S ની તેજ 18S બેન્ડ કરતા બમણી કરતાં વધુ હોય, તો અમે RNAની ગુણવત્તાને સારી ગણીએ છીએ.
ઉપરોક્ત બે પદ્ધતિઓ છે જેનો આપણે સામાન્ય રીતે ઉપયોગ કરીએ છીએ, પરંતુ આ બેમાંથી કોઈપણ પદ્ધતિ અમને સ્પષ્ટપણે કહી શકતી નથી કે RNA સોલ્યુશનમાં શેષ RNase છે કે કેમ.જો સોલ્યુશનમાં ખૂબ જ ઓછી માત્રામાં RNase હોય, તો ઉપરોક્ત પદ્ધતિથી તેને શોધવાનું આપણા માટે મુશ્કેલ છે, પરંતુ પછીની મોટાભાગની એન્ઝાઈમેટિક પ્રતિક્રિયાઓ 37 ડિગ્રીથી ઉપર અને લાંબા સમય સુધી કરવામાં આવે છે.આ રીતે, જો RNA સોલ્યુશનમાં RNase ની ખૂબ જ ઓછી માત્રા હોય, તો પછીના પ્રયોગોમાં તેમની ભૂમિકા ભજવવા માટે ખૂબ જ યોગ્ય વાતાવરણ અને સમય હશે, અને અલબત્ત આ સમયે પ્રયોગ ઠંડા હશે.નીચે અમે એક પદ્ધતિ રજૂ કરીએ છીએ જે RNA સોલ્યુશનમાં શેષ RNase છે કે કેમ તેની પુષ્ટિ કરી શકે છે.
 
3. ગરમી જાળવણી પરીક્ષણ
નમૂનાની સાંદ્રતા અનુસાર, આરએનએ સોલ્યુશનમાંથી બે 1000 એનજી આરએનએ દોરો અને તેને 0.5 મિલી સેન્ટ્રીફ્યુજ ટ્યુબમાં ઉમેરો, અને તેને pH 7.0 ટ્રિસ બફર સાથે 10 ul ના કુલ જથ્થામાં પૂરક કરો, અને પછી ટ્યુબની કેપને સીલ કરો.તેમાંથી એકને 70 ડિગ્રી સેલ્સિયસ તાપમાને સતત પાણીના સ્નાનમાં મૂકો અને તેને 1 કલાક માટે ગરમ રાખો.બીજો ભાગ -20°C રેફ્રિજરેટરમાં 1 કલાક માટે સંગ્રહિત કરવામાં આવ્યો હતો.જ્યારે સમય પૂરો થાય, ત્યારે ઇલેક્ટ્રોફોરેસીસ માટે બે નમૂનાઓ દૂર કરો.ઇલેક્ટ્રોફોરેસીસ પૂર્ણ થયા પછી, બેના ઇલેક્ટ્રોફોરેટિક બેન્ડની તુલના કરો.જો બંનેના બેન્ડ એકસમાન હોય અથવા તેમાં કોઈ નોંધપાત્ર તફાવત ન હોય (અલબત્ત, તેમના બેન્ડ પણ પદ્ધતિ 2 ની શરતોને પૂર્ણ કરે છે), તો તેનો અર્થ એ કે RNA સોલ્યુશનમાં કોઈ અવશેષ RNase દૂષણ નથી, અને RNA ની ગુણવત્તા ખૂબ સારી છે.તેનાથી વિપરિત, જો 70°C પર ઉકાળવામાં આવેલ નમૂના સ્પષ્ટ અધોગતિ દર્શાવે છે, તો તે સૂચવે છે કે RNA દ્રાવણમાં RNase દૂષણ છે.
 
2 આરએનએ નિષ્કર્ષણ માટે પ્રાયોગિક પદ્ધતિઓ અને તકનીકો
આરએનએ કાઢતી વખતે આપણે વારંવાર જે સમસ્યાઓનો સામનો કરીએ છીએ તે છે: (1) આરએનએ ઉપજ ઓછી છે;(2) આરએનએમાં ગંભીર મીઠાનું પ્રદૂષણ છે;(3) આરએનએમાં ગંભીર કાર્બનિક દ્રાવક પ્રદૂષણ છે;(4) નમૂનાનું અધોગતિ અને અન્ય સમસ્યાઓ
 
1. સામાન્ય રીતે ઉપયોગમાં લેવાતા કુલ RNA નિષ્કર્ષણ રીએજન્ટ
ગુઆનીડીન આઇસોથિયોસાયનેટ પદ્ધતિ અને ટ્રાઈઝોલ પદ્ધતિ એ પ્રાણીની પેશીઓ અને પ્રાણી કોષોમાંથી કુલ આરએનએના નિષ્કર્ષણ માટે સૌથી સામાન્ય રીતે ઉપયોગમાં લેવાતી પદ્ધતિઓ છે.તે ખાસ કરીને નાના નમૂનાઓ અને પેશીઓ માટે યોગ્ય છે જેને કાઢવામાં ખાસ કરીને મુશ્કેલ હોય છે, જેમ કે સસલાની ચામડી અને પ્રાણીની સંયોજક પેશીઓમાંથી કુલ આરએનએનું નિષ્કર્ષણ;વધુમાં, ટ્રાઇઝોલ, સામાન્ય હેતુના લિસિસ રીએજન્ટ તરીકે, છોડની પેશીઓ, બેક્ટેરિયા, ફૂગ અને અન્ય પેશીઓના નિષ્કર્ષણ માટે પણ વાપરી શકાય છે.કેમેલિયા ઓલિફેરા, ચાના પાંદડા, રેપસીડ વગેરે જેવા પોલિસેકરાઇડ્સ અને પોલિફીનોલ્સ ધરાવતા છોડની પેશીઓ માટે, કુલ આરએનએ કાઢવા માટે પણ CTAB પદ્ધતિનો ઉપયોગ કરી શકાય છે.

પરંપરાગત પદ્ધતિ તરીકે, ડબલ-કૉલમ પદ્ધતિ પણ તેના સામાન્ય તાપમાનની કામગીરીને કારણે ખૂબ જ લોકપ્રિય છે, RNase ઉમેરવાની જરૂર નથી અને સલામતી - નિષ્કર્ષણ માટે ક્લોરોફોર્મ, ફિનોલ્સ અને અન્ય કાર્બનિક રીએજન્ટ નથી.(ભલામણ કરેલ ઉત્પાદનો )