પ્રયોગ કર્મચારીઓના વર્તનને પ્રમાણિત કરવા માટે PCR પ્રયોગ SOP ની સ્થાપના કરો.
પ્રયોગકર્તા ઓપરેટિંગ પ્રક્રિયાઓનું ચુસ્તપણે પાલન કરે છે, અને PCR પ્રદૂષણને ઘટાડે છે જે માનવ પરિબળોને કારણે થઈ શકે છે અથવા પ્રદૂષણની ઘટનાને અટકાવે છે.વધુમાં, પ્રયોગકર્તા પાસે અનુરૂપ વ્યાવસાયિક જ્ઞાન અને કૌશલ્ય હોવું જોઈએ, જેમાં સંબંધિત સાધનોના સંચાલનમાં નિપુણતા, સમગ્ર કાર્ય પ્રક્રિયાની સ્પષ્ટતા, દૂષણની સારવાર પદ્ધતિઓ અને પ્રયોગશાળા ગુણવત્તા નિયંત્રણ પદ્ધતિઓમાં નિપુણતા અને પરીક્ષણ પરિણામોનું યોગ્ય રીતે અર્થઘટન કરવામાં સક્ષમ હોવું જોઈએ.
પ્રમાણભૂત પીસીઆર લેબોરેટરીની સ્થાપના કરો.
પીસીઆર પ્રયોગશાળાને સૈદ્ધાંતિક રીતે ચાર ક્ષેત્રોમાં વિભાજિત કરવામાં આવી છે, જેમ કે રીએજન્ટ તૈયારી ક્ષેત્ર, નમૂના પ્રક્રિયા ક્ષેત્ર, એમ્પ્લીફિકેશન ક્ષેત્ર અને એમ્પ્લીફિકેશન ઉત્પાદન વિશ્લેષણ ક્ષેત્ર.પ્રથમ બે વિસ્તારો પ્રી-એમ્પ્લીફિકેશન વિસ્તારો છે, અને છેલ્લા બે વિસ્તારો પોસ્ટ-એમ્પ્લીફિકેશન વિસ્તારો છે.પ્રી-એમ્પ્લીફિકેશન ઝોન અને પોસ્ટ-એમ્પ્લીફિકેશન ઝોન સખત રીતે અલગ હોવા જોઈએ.પ્રાયોગિક સામગ્રીઓ, રીએજન્ટ્સ, રેકોર્ડિંગ પેપર, પેન, સફાઈ સામગ્રી વગેરે, માત્ર પ્રી-એમ્પ્લીફિકેશન એરિયાથી પોસ્ટ-એમ્પ્લીફિકેશન એરિયામાં જ વહી શકે છે, એટલે કે રીએજન્ટ તૈયારી એરિયા → સેમ્પલ પ્રોસેસિંગ એરિયા → એમ્પ્લીફિકેશન એરિયા → એમ્પ્લીફિકેશન પ્રોડક્ટ એનાલિસિસ એરિયા, અને પાછળની તરફ વહેવું જોઈએ નહીં.પ્રયોગશાળામાં હવાનો પ્રવાહ પણ પ્રી-એમ્પ્લીફિકેશન એરિયાથી પોસ્ટ-એમ્પ્લીફિકેશન એરિયામાં વહેવો જોઈએ, અને પાછળની તરફ વહેવો જોઈએ નહીં.આદર્શ પીસીઆર લેબોરેટરી ડિઝાઇન નીચે દર્શાવેલ છે:
આકૃતિ A: બફર રૂમમાં નકારાત્મક દબાણ સાથે આદર્શ PCR પ્રયોગશાળા સેટઅપ મોડ
આકૃતિ B: બફર રૂમમાં હકારાત્મક દબાણ સાથે આદર્શ PCR પ્રયોગશાળા સેટઅપ મોડ
આકૃતિ A અને આકૃતિ B માં આપેલ PCR લેબોરેટરી સેટઅપ ડાયાગ્રામ વધુ આદર્શ સેટઅપ મોડ હોવા જોઈએ, અને શરતો સાથે લેબોરેટરી ડિઝાઇન માટે આ મોડનો સંદર્ભ લઈ શકે છે.સામાન્ય પ્રયોગશાળાઓ માટે, એવી ભલામણ કરવામાં આવે છે કે પીસીઆર એમ્પ્લીફિકેશન એરિયા અને પ્રોડક્ટ એનાલિસિસ એરિયાને અલગ કરી શકાય અને કવરનું ઓપનિંગ સેમ્પલ તૈયાર કરવાના એરિયા અને પીસીઆર એમ્પ્લીફિકેશન એરિયામાં શક્ય એટલું ઓછું કરવું જોઈએ.યાદ રાખો: ઉત્પાદન વિશ્લેષણ ક્ષેત્રમાં ઉત્પાદનો અને પ્રાયોગિક પુરવઠોને નમૂના તૈયાર કરવાના વિસ્તાર અને PCR એમ્પ્લીફિકેશન વિસ્તારમાં લઈ જવા પર સખત પ્રતિબંધ છે.
જો પ્રયોગશાળા ફક્ત પીસીઆર શોધ અને ઓળખ કરે છે, તો પરંપરાગત પીસીઆરને બદલે ફ્લોરોસન્ટ જથ્થાત્મક પીસીઆરનો ઉપયોગ કરવાની ભલામણ કરવામાં આવે છે.
ફ્લોરોસેન્સ જથ્થાત્મક PCR શોધ પરિણામોને ફ્લોરોસેન્સ સંકેતો દ્વારા એકત્રિત અને વિશ્લેષણ કરી શકાય છે, તેથી પ્રતિક્રિયા પછી ઇલેક્ટ્રોફોરેસિસ માટે ઢાંકણ ખોલવાની જરૂર નથી, જે એરોસોલ્સ બનાવવા માટે પ્રતિક્રિયા ઉત્પાદનોના લીકેજને કારણે થતા PCR ઉત્પાદનના દૂષણને ટાળે છે.જો તમે જેલ ઇલેક્ટ્રોફોરેસીસના લોડિંગ સ્ટેપ દરમિયાન કેપ ઓપનિંગની સંખ્યામાં વધારો કરો છો, તો એરોસોલ દૂષણ થવાની સંભાવના છે.માત્રાત્મક પીસીઆરના ઉપયોગને પ્રોત્સાહન આપવા અને ગુણાત્મક પીસીઆરને ધીમે ધીમે બદલવાની ભલામણ કરવામાં આવે છે.
PCR પ્રતિક્રિયા માટે UNG એન્ટિ-પીસીઆર પ્રોડક્ટ દૂષણ સિસ્ટમનો ઉપયોગ થાય છે.
સિસ્ટમ dTTP ને બદલે dUTP નો ઉપયોગ કરે છે.પીસીઆર પ્રતિક્રિયા પછી, તમામ પીસીઆર ઉત્પાદનો (ડીએનએ ટુકડાઓ) dUTP સાથે સમાવિષ્ટ થાય છે;PCR પ્રતિક્રિયાના આગલા રાઉન્ડમાં, સિસ્ટમમાં ઉમેરવામાં આવેલ UNG એન્ઝાઇમ PCR પહેલાં 5 મિનિટ માટે 37°C પર ઉકાળવામાં આવે છે, જે ખાસ કરીને dUTP ધરાવતા તમામ DNA ટુકડાઓને ડિગ્રેડ કરી શકે છે અને પછી PCR પ્રતિક્રિયા કરે છે.આ પીસીઆર ઉત્પાદનો દ્વારા થતા એરોસોલ દૂષણને સંપૂર્ણપણે દૂર કરી શકે છે.અસર નીચેની આકૃતિમાં બતાવવામાં આવી છે:
નોંધ: સીધી પીસીઆર શ્રેણી માટે, તમે ફોરજીનની એન્ટિ-પીસીઆર પ્રોડક્ટ દૂષણ સિસ્ટમની શ્રેણીના ઉત્પાદનો પસંદ કરી શકો છો.સૂચન કરો
મોટા પાયે જીનોટાઇપિંગ પરીક્ષણ હાથ ધરતી પ્રયોગશાળાઓ માટે, વાજબી પ્રયોગશાળાઓના નિર્માણ ઉપરાંત રીએજન્ટના પરીક્ષણ માટે UNG એન્ટિ-પીસીઆર પ્રોડક્ટ દૂષણ પ્રણાલીનો ઉપયોગ કરવાની ભારપૂર્વક ભલામણ કરવામાં આવે છે.
રીમાઇન્ડર: આ સિસ્ટમનો ઉપયોગ પીસીઆર ઉત્પાદન દૂષણને દૂર કરી શકતું નથી જે પહેલાથી જ થઈ ગયું છે.તેથી, સંબંધિત પરીક્ષણની શરૂઆતમાં UNG સિસ્ટમનો ઉપયોગ કરવો જોઈએ, અને PCR એમ્પ્લીફિકેશન માટે UNG સિસ્ટમનો ઉપયોગ કરવો જોઈએ, જેથી PCR ઉત્પાદનોના દૂષણને અટકાવી શકાય ફોલ્સ પોઝિટિવ.
મોટા પાયે પરીક્ષણ કરતી વખતે ફોરજીનની ડાયરેક્ટ પીસીઆર-યુએનજી સિસ્ટમનો ઉપયોગ કરવાની ભલામણ કરવામાં આવે છે, જેમ કે:
પ્લાન્ટ લીફ ડાયરેક્ટ પીસીઆર કીટ-યુએનજી;
પ્લાન્ટ સીડ ડાયરેક્ટ પીસીઆર કીટ-યુએનજી;
એનિમલ ટિશ્યુ ડાયરેક્ટ પીસીઆર કીટ-યુએનજી;
માઉસ ટેઈલ ડાયરેક્ટ પીસીઆર કીટ-યુએનજી;
ઝેબ્રા ફિશ ડાયરેક્ટ પીસીઆર કીટ-યુએનજી.
ફોરજીનમાંથી કિટ્સની આ શ્રેણીતે માત્ર ઝડપથી અને મોટા પાયે પીસીઆર શોધ કરી શકતું નથી, પરંતુ પીસીઆર ઉત્પાદનના દૂષણને અસરકારક રીતે અટકાવી અને નિયંત્રિત પણ કરી શકે છે.
પોસ્ટ સમય: માર્ચ-19-2021
