લેખકો: વાંગ Xiaoyan, Zhao Eryu

એકમ: જીઆઓઝોઉ હોસ્પિટલ, ડોંગફાંગ હોસ્પિટલ ટોંગજી યુનિવર્સિટી સાથે જોડાયેલી

હાલમાં, શ્વસન રોગકારક ન્યુક્લિક એસિડની તપાસ માટે મુખ્ય નમૂનાનો પ્રકાર ગળામાં સ્વેબ છે.સામાન્ય રીતે ઉપયોગમાં લેવાતા ઘણા પ્રકારના નમૂના સંરક્ષણ ઉકેલો છે, જે તમામને પરિવહન અને સંગ્રહ માટે રેફ્રિજરેટેડ અથવા સ્થિર કરવાની જરૂર છે;સંગ્રહ અને પરિવહન પ્રક્રિયા દરમિયાન નીચા તાપમાનની સમગ્ર પ્રક્રિયાને નિયંત્રિત કરવી મુશ્કેલ છે, અને નમૂના પરીક્ષણ પહેલાં ગુણવત્તા નિયંત્રણની ખાતરી કરવી મુશ્કેલ છે.^[1-2].

RNase (RNase) એ એન્ડોન્યુક્લીઝ છે જે આરએનએને હાઇડ્રોલાઇઝ કરે છે, મુખ્યત્વે ન્યુક્લિયોટાઇડ્સ વચ્ચેના ફોસ્ફોડિસ્ટર બોન્ડને તોડે છે.RNase પરમાણુ ખૂબ જ સ્થિર છે, બંધારણમાં ડિસલ્ફાઇડ બોન્ડ્સ છે, અને તેની પ્રવૃત્તિમાં divalent cationsની હાજરીની જરૂર હોતી નથી, તેથી RNase સરળતાથી વિકૃત થતું નથી, અને ઊંચા તાપમાને અથવા ડિનેચરન્ટ્સના ઉપયોગ પછી પણ તેને પુનઃપ્રાપ્ત કરવું સરળ છે.RNases ને અંતર્જાત અને એક્ઝોજેનસમાં વિભાજિત કરવામાં આવે છે.જ્યારે કોષો ફાટી જાય ત્યારે અંતર્જાત RNases તે જ સમયે મુક્ત થઈ શકે છે.તેથી, અંતર્જાત RNases ની ભૂમિકાને નાબૂદ કરવી એ RNA નિષ્કર્ષણ પ્રક્રિયામાં ખૂબ જ મહત્વપૂર્ણ પગલું છે.એક્સોજેનસ RNases વ્યાપકપણે વિતરિત કરવામાં આવે છે.હવા, માનવ ત્વચા, વાળ અને લાળમાં RNase અસ્તિત્વ ધરાવે છે, જે RNA ના સરળ અધોગતિ માટે મહત્વપૂર્ણ કારણો છે.^[૩].

ડેટા ક્વેરી

CANS-CL02-A009 “એપ્લિકેશન ઑફ મેડિકલ લેબોરેટરી ક્વોલિટી એન્ડ કમ્પિટન્સી એક્રેડિટેશન ગાઇડલાઇન્સ ઇન ધ ફિલ્ડ ઑફ મોલેક્યુલર ડાયગ્નોસિસ” ટેકનિકલ આવશ્યકતાઓમાં દરખાસ્ત કરે છે કે એપ્લિકેશન અનુસાર યોગ્ય પાણીની ગુણવત્તાના ધોરણો ઘડવામાં આવે;નિકાલજોગ હવાચુસ્ત કન્ટેનર:

RNase/વર્ગીકરણ

(1) RNase A

રિબોન્યુક્લીઝ A (RNase A), બોવાઇન સ્વાદુપિંડમાંથી તારવેલી, એ એન્ડોરીબોન્યુક્લીઝ છે જે ખાસ કરીને RNA પર પિરિમિડીન અવશેષોના 3′ છેડા પર હુમલો કરી શકે છે, નજીકના ન્યુક્લિયોટાઇડ્સ દ્વારા રચાયેલ સાયટોસિન અથવા યુરેસિલને કાપી શકે છે.ફોસ્ફોડીસ્ટર બોન્ડ, પ્રતિક્રિયાનું અંતિમ ઉત્પાદન 3′ પાયરિમિડિન ન્યુક્લિયોટાઇડ અને અંતમાં 3′ પાયરિમિડિન ન્યુક્લિયોટાઇડ સાથે ઓલિગોન્યુક્લિયોટાઇડ છે.

(2) RNase T1

રિબોન્યુક્લીઝ T1 (RNase T1) એસ્પરગિલસ ઓર્ઝામાંથી ઉતરી આવ્યું છે, તે ખાસ કરીને ગ્વાનિનના 3′-ટર્મિનલ ફોસ્ફેટ પર કાર્ય કરે છે, અને ક્લીવેજ સાઇટ ગ્વાનિનના 3′ ફોસ્ફેટ અને અડીને આવેલા 5′ હાઈડ્રોક્સિલની વચ્ચે છે.પ્રતિક્રિયાનું અંતિમ ઉત્પાદન 3′ગુઆનાલિક એસિડ અને અંતે 3′ગ્વેનાલિક એસિડ સાથે ઓલિગોન્યુક્લિયોટાઇડ ટુકડાઓ છે.

(3) RNase H

રિબોન્યુક્લીઝ એચ (RNase H) સૌપ્રથમ વાછરડાની થાઇમસ પેશીમાંથી મળી આવ્યો હતો, અને તેના એન્કોડિંગ જનીનને એસ્ચેરીચીયા કોલીમાં ક્લોન કરવામાં આવ્યું છે.તે ખાસ કરીને ડીએનએને ડિગ્રેડ કરી શકે છે: આરએનએ હાઇબ્રિડ ડુપ્લેક્સમાં આરએનએ સ્ટ્રેન્ડ્સ, 3′-OH અને 5′-મોનોફોસ્ફેટ સાથે ઓલિગોન્યુક્લિયોટાઇડ્સ અને મોનોન્યુક્લિયોટાઇડ્સમાં પરિણમે છે, તે સિંગલ- અથવા ડબલ-સ્ટ્રેન્ડેડ ડીએનએ અથવા આરએનએને ડિગ્રેડ કરી શકતું નથી.

RNase

કાર્ય અને ઉપયોગ

રિબોન્યુક્લીઝ રિબોન્યુક્લીક એસિડ (આરએનએ) ના અધોગતિને ઉત્પ્રેરિત કરી શકે છે અને કૃત્રિમ રીતે સંશ્લેષણ કરી શકાય છે.ઔષધીય મલમનો ઉપયોગ ઇજા અને સાંધાના દુખાવાની સારવાર માટે થાય છે.અહેવાલો અનુસાર, રિબોન્યુક્લીઝ યજમાન કોષ ચયાપચયને બદલી શકે છે, વાયરસ સંશ્લેષણને અટકાવી શકે છે, વિટ્રોમાં ઈન્ફલ્યુએન્ઝા વાયરસના પ્રસારને અટકાવી શકે છે અને ચિકન એમ્બ્રોયોમાં રસી અને હર્પીસ વાયરસની રચનાને અટકાવી શકે છે.180 મિલિગ્રામના દૈનિક ઇન્ટ્રામસ્ક્યુલર ઇન્જેક્શનનો ક્લિનિકલ ઉપયોગ, રોગચાળાના એન્સેફાલીટીસની સારવાર માટે ફાયદાકારક, રિબોન્યુક્લીઝ રિબોન્યુક્લીક એસિડ (RNA) ના અધોગતિને ઉત્પ્રેરિત કરી શકે છે અને હવે કૃત્રિમ રીતે સંશ્લેષણ કરી શકાય છે.ઔષધીય મલમનો ઉપયોગ ઇજા અને સાંધાના દુખાવાની સારવાર માટે થાય છે.અહેવાલો અનુસાર, રિબોન્યુક્લીઝ યજમાન કોષ ચયાપચયને બદલી શકે છે, વાયરસ સંશ્લેષણને અટકાવી શકે છે, વિટ્રોમાં ઈન્ફલ્યુએન્ઝા વાયરસના પ્રસારને અટકાવી શકે છે અને ચિકન એમ્બ્રોયોમાં રસી અને હર્પીસ વાયરસની રચનાને અટકાવી શકે છે.રોગચાળાના એન્સેફાલીટીસની સારવાર માટે દરરોજ 180 મિલિગ્રામના ઇન્ટ્રામસ્ક્યુલર ઇન્જેક્શનના રિબોન્યુક્લીઝનો ક્લિનિકલ ઉપયોગ ફાયદાકારક છે.

RNase

અવરોધક વ્યાખ્યા

RNase અવરોધક એકમની વ્યાખ્યા: 5ng RNase A ની 50% પ્રવૃત્તિને રોકવા માટે જરૂરી એન્ઝાઇમની માત્રા એક એકમ છે.

RNase ઇન્હિબિટર્સ કેવી રીતે કામ કરે છે

ગુઆનીડીન આઇસોથિયોસાયનેટ:

Guanidine isothiocyanate એ મોલેક્યુલર ફોર્મ્યુલા C2H6N4S સાથેનું એક કાર્બનિક સંયોજન છે.મુખ્યત્વે જૈવિક દવા, રાસાયણિક રીએજન્ટ્સ વગેરેમાં વપરાય છે. ગુઆનીડીન આઇસોથિયોસાયનેટ એ પ્રોટીન લાયસિંગ એજન્ટ છે, અને તે મોટાભાગે મોલેક્યુલર ડાયગ્નોસ્ટિક રીએજન્ટ્સમાં લિસિસ સોલ્યુશનના મુખ્ય ઘટક તરીકે વપરાય છે.તે પેશીને લીઝ કરી શકે છે, કોષની રચનાને નષ્ટ કરી શકે છે અને ન્યુક્લીક એસિડને ન્યુક્લિયોપ્રોટીનથી અલગ કરી શકે છે અને RNase માટે મજબૂત વિકૃતીકરણ ધરાવે છે.તે હાલમાં સૌથી અસરકારક RNase અવરોધક છે.

TRIzol એ નવલકથા કુલ આરએનએ નિષ્કર્ષણ રીએજન્ટ છે જે કોષો અથવા પેશીઓમાંથી કુલ આરએનએ સીધા જ બહાર કાઢી શકે છે.તેમાં ફિનોલ અને ગુઆનીડીન આઇસોથિયોસાયનેટ જેવા પદાર્થો હોય છે, જે કોષોને ઝડપથી વિક્ષેપિત કરી શકે છે અને કોષો દ્વારા મુક્ત થતા ન્યુક્લીઝને અટકાવે છે.

(જો કે, ગ્વાનિડિન આઇસોથિયોસાયનેટ લેબ સંશોધકોના સ્વાસ્થ્ય માટે જોખમી છે.)

આરનાસીન:

એસિડ ગ્લાયકોપ્રોટીન ઉંદરના યકૃત અથવા માનવ બ્લાસ્ટોડર્મમાંથી કાઢવામાં આવે છે.Rnasin એ RNase નો બિન-સ્પર્ધાત્મક અવરોધક છે, જે તેમને નિષ્ક્રિય કરવા માટે વિવિધ RNase સાથે જોડાઈ શકે છે.

(વધુ વિગતો:https://www.foreivd.com/foreasy-rnase-inhibitor-product/)

Hઉચ્ચ તાપમાન:

ઉચ્ચ તાપમાન પ્રોટીન વિકૃતિકરણનું સામાન્ય માધ્યમ પણ છે.

ડાયથિલપાયરોકાર્બોનેટ (DEPC):

DEPC એ એક મજબૂત પરંતુ અપૂર્ણ RNase અવરોધક છે, જે RNase સક્રિય જૂથની એમિનો એસિડ ઇમિડાઝોલ રિંગ સાથે સંયોજિત કરીને પ્રોટીનને ડિનેચર કરવા માટે RNase પ્રવૃત્તિને અટકાવી શકે છે.

વેનાડીલ રિબોન્યુક્લિયોસાઇડ સંકુલ:

વેનેડિયમ ઓક્સાઇડ આયનો અને ન્યુક્લિયોસાઇડ્સ દ્વારા રચાયેલ એક જટિલ, જે સંક્રમણ પદાર્થોના સ્વરૂપમાં RNase સાથે જોડાય છે, જે લગભગ સંપૂર્ણપણે RNase ની પ્રવૃત્તિને અટકાવી શકે છે.

અન્ય:

SDS, યુરિયા, ડાયટોમેસિયસ અર્થ વગેરે પણ RNase પર ચોક્કસ અવરોધક અસર ધરાવે છે.

નિષ્ણાત સમીક્ષાઓ

લી યુજી ચીફ ટેકનિશિયન

લેબોરેટરી વિભાગના નિયામક, જિયાઝોઉ હોસ્પિટલ, ડોંગફાંગ હોસ્પિટલ ટોંગજી યુનિવર્સિટી સાથે સંલગ્ન

એક્સોજેનસ RNase ના બાયોડિગ્રેડેશનને રોકવા માટે, RNA નિષ્કર્ષણ પ્રક્રિયા દરમિયાન માસ્ક, ગ્લોવ્સ અને ટોપીઓ પહેરવા જોઈએ અને વારંવાર બદલવા જોઈએ.તમામ કાચનાં વાસણોને 2 કલાકથી વધુ સમય માટે 200°C તાપમાને સૂકવવાના ઓવનમાં શેકવા જોઈએ.પકવવા માટે વપરાતી સામગ્રી, જેમ કે પ્લાસ્ટિક,ને DEPC પાણીથી ટ્રીટ કરવાની જરૂર છે, અને પછી નિસ્યંદિત પાણીથી ધોવા જોઈએ.આરએનએના નિષ્કર્ષણ, જાળવણી અને ઓળખ માટે ઉપયોગમાં લેવાતા રીએજન્ટ્સ અથવા ઉપકરણો આરએનએને સમર્પિત હોવા જોઈએ, અને સ્વતંત્ર આરએનએ ઓપરેશન ક્ષેત્રની સ્થાપના કરવી જોઈએ.

સંદર્ભ:

[1] સ્મિથ-વોન HC, Binks MJ, Beissbarth J, et al.સ્વદેશી ઓસ્ટ્રેલિયન બાળકો[J] માં તીવ્ર નીચલા શ્વસન ચેપની શરૂઆત પહેલા તરત જ નાસોફેરિન્ક્સમાં બેક્ટેરિયા અને વાયરસ.Eur J Clin Microbiol Infect Dis,2018,37 (9): 1785-1794.

[2] ચાઇનીઝ પ્રિવેન્ટિવ મેડિસિન એસોસિએશનની હોસ્પિટલ ચેપ નિયંત્રણ શાખા.ક્લિનિકલ માઇક્રોબાયલ નમૂનાઓના સંગ્રહ અને નિરીક્ષણ માટે માર્ગદર્શિકા [J].ચાઈનીઝ જર્નલ ઓફ હોસ્પિટલ ઈન્ફેક્શન, 2018(20):3192-3200.

[૩] “ક્લિનિકલ ટેસ્ટ ટેન થાઉઝન્ડ કેમ મોલેક્યુલર બાયોલોજી ટેસ્ટ વોલ્યુમ”