હું માનું છું કે પીસીઆર રિએક્શન કરતી વખતે દરેક વ્યક્તિને હંમેશા આવી અથવા આવી સમસ્યાઓનો સામનો કરવો પડશે, પરંતુ તેમાંના મોટા ભાગનાને બે મુખ્ય સમસ્યાઓમાં વર્ગીકૃત કરી શકાય છે:

જનીન નમૂનાનું ખૂબ ઓછું એમ્પ્લીફિકેશન (એમ્પ્લીફિકેશન);
અતિશય બિન-લક્ષ્ય જનીન એમ્પ્લીફિકેશન.
એડિટિવ્સનો ઉપયોગ એ આ સમસ્યાઓને ઉકેલવા માટેની એક સામાન્ય વ્યૂહરચના છે.સામાન્ય રીતે ઉમેરણોની ભૂમિકા બે પાસાઓ ધરાવે છે:
ગૌણ માળખુંજનીનો (ગૌણ માળખું);
બિન-વિશિષ્ટ પ્રાઇમિંગ ઘટાડો.
આજે, સંપાદક તમને PCR પ્રતિક્રિયાઓમાં સામાન્ય ઉમેરણો અને તેમના કાર્યોનો ટૂંકમાં પરિચય કરાવશે.
ઉમેરણો જે ગૌણ માળખું ઘટાડે છે
સલ્ફોક્સાઇડ(DMSO)
જનીન નમૂનાઓઉચ્ચ GC સામગ્રી સાથે.જો કે, DMSO પણ Taq પોલિમરેઝ પ્રવૃત્તિને મોટા પ્રમાણમાં ઘટાડે છે.તેથી, દરેક વ્યક્તિએ નમૂનાની સુલભતા અને પોલિમરેઝની પ્રવૃત્તિને સંતુલિત કરવી પડશે.સંપાદક સૂચવે છે કે તમે તમારા પ્રયોગને અનુરૂપ એકાગ્રતા શોધવા માટે DSMO ની વિવિધ સાંદ્રતાનો પ્રયાસ કરી શકો છો, જેમ કે 2% થી 10% સુધી.
બિન-આયોનિક ડીટરજન્ટ
બિન-આયોનિક ડિટર્જન્ટ, જેમ કે 0.1-1% ટ્રાઇટોન X-100, ટ્વીન 20 અથવા NP-40, સામાન્ય રીતે DNA ગૌણ માળખું ઘટાડે છે.જો કે આ ટેમ્પલેટ જનીનનું એમ્પ્લીફિકેશન વધારી શકે છે, તે બિન-વિશિષ્ટ એમ્પ્લીફિકેશનની મુશ્કેલીનું કારણ પણ બનશે.તેથી, આ ઉમેરણો કાટમાળ વિના ઓછી ઉપજ આપતી પીસીઆર પ્રતિક્રિયાઓ માટે સારી રીતે કામ કરે છે, પરંતુ પ્રમાણમાં અશુદ્ધ પીઆરસી પ્રતિક્રિયાઓ માટે એટલું સારું નથી.બિન-આયોનિક ડિટર્જન્ટનો બીજો ફાયદો એ છે કે SDS દૂષણમાં ઘટાડો.સામાન્ય રીતે ડીએનએ નિષ્કર્ષણ પ્રક્રિયા દરમિયાન, એસડીએસને પીસીઆર સ્ટેપ પર લાવવામાં આવશે, જે પોલિમરેઝની પ્રવૃત્તિને મોટા પ્રમાણમાં અટકાવે છે.તેથી, પ્રતિક્રિયામાં 0.5% Tween-20 અથવા Tween-40 ઉમેરવાથી SDS ની નકારાત્મક અસરોને તટસ્થ કરી શકાય છે.
બેટાઈન_
Betaine ગૌણ બંધારણની રચના ઘટાડીને DNA એમ્પ્લીફિકેશનને સુધારી શકે છે અને તે સામાન્ય રીતે વ્યાપારી પીસીઆર કીટમાં "રહસ્ય" ઉમેરો છે.જો તમે betaine નો ઉપયોગ કરવા માંગતા હો, તો તમારે betaine અથવા betaine mono-hydrate (Betaine or Betaine mono-hydrate), પરંતુ betaine hydrochloride (Betaine HCl) નહિ, 1-1.7M ની અંતિમ સાંદ્રતામાં સમાયોજિત કરવું જોઈએ.Betaine વિશિષ્ટતાને સુધારવામાં પણ મદદ કરી શકે છે કારણ કે તે DNA મેલ્ટિંગ/DNA ડિનેચરેશનની બેઝ પેયર કમ્પોઝિશનની અવલંબનને દૂર કરે છે.
બિન-વિશિષ્ટ પ્રાઇમિંગ ઘટાડવા માટે ઉમેરણો
ફોર્મમાઇડ
ફોર્મામાઇડ એ સામાન્ય રીતે ઉપયોગમાં લેવાતી કાર્બનિક પીસીઆર એડિટિવ છે.તે ડીએનએમાં મુખ્ય ગ્રુવ અને નાના ગ્રુવ સાથે સંયોજિત થઈ શકે છે, જેનાથી માસ્ટર ડીએનએ ડબલ હેલિક્સની સ્થિરતા ઘટે છે અને ડીએનએના ગલન તાપમાનને ઘટાડે છે.PCR પ્રયોગોમાં ઉપયોગમાં લેવાતા ફોર્મમાઇડની સાંદ્રતા સામાન્ય રીતે 1%-5% હોય છે.
ટેટ્રામેથાઈલએમોનિયમ ક્લોરાઇડ( TMAC)
ટેટ્રામેથિલેમોનિયમ ક્લોરાઇડ વર્ણસંકરીકરણની વિશિષ્ટતા (હાઇબ્રિડાઇઝેશન વિશિષ્ટતા) વધારી શકે છે અને ડીએનએના ગલન તાપમાનમાં વધારો કરી શકે છે.આમ, TMAC બિન-વિશિષ્ટ પ્રાઇમિંગને દૂર કરી શકે છે અને DNA અને RNA ના મિસબાઇન્ડિંગને ઘટાડી શકે છે.જો તમે ઉપયોગ કરો છોડિજનરેટ પ્રાઇમર્સPCR પ્રતિક્રિયામાં, TMAC ઉમેરવાનું યાદ રાખો, જેનો ઉપયોગ સામાન્ય રીતે 15-100mM ની સાંદ્રતામાં થાય છે.
અન્ય સામાન્ય ઉમેરણો
ઉપરોક્ત ઉલ્લેખિત ઉમેરણોની બે શ્રેણીઓ ઉપરાંત, પીસીઆર પ્રતિક્રિયાઓમાં ઘણા સામાન્ય ઉમેરણો છે, જો કે તેમની પાસે વિવિધ કાર્યો છે, તે પણ ખૂબ જ મહત્વપૂર્ણ છે.
મેગ્નેશિયમ આયન
મેગ્નેશિયમ આયન એ પોલિમરેઝનું અનિવાર્ય કોફેક્ટર (કોફેક્ટર) છે, એટલે કે, મેગ્નેશિયમ આયન વિના, પોલિમરેઝ નિષ્ક્રિય છે.જો કે, વધુ પડતા મેગ્નેશિયમ આયન પોલિમરેઝની કાર્યક્ષમતાને પણ અસર કરી શકે છે.દરેક પીસીઆર પ્રતિક્રિયામાં મેગ્નેશિયમ આયનોની સાંદ્રતા અલગ અલગ હશે.ચેલેટિંગ એજન્ટો (જેમ કે EDTA અથવા સાઇટ્રેટ), dNTPs અને પ્રોટીનની સાંદ્રતા મેગ્નેશિયમ આયનોની સાંદ્રતાને અસર કરે છે.તેથી, જો તમને તમારા પીસીઆર પ્રયોગમાં સમસ્યા હોય, તો તમે વિવિધ મેગ્નેશિયમ આયન સાંદ્રતા બદલવાનો પ્રયાસ કરી શકો છો, ઉદાહરણ તરીકે, 1.0 થી 4.0 એમએમ સુધી, વચ્ચે 0.5-1 એમએમના અંતરાલ સાથે.
તે નોંધવું યોગ્ય છે કે બહુવિધ ફ્રીઝ-થો ચક્ર મેગ્નેશિયમ ક્લોરાઇડ સોલ્યુશનના સાંદ્રતા સ્તરીકરણ તરફ દોરી શકે છે.તેથી, તમારે દરેક ઉપયોગ પહેલાં તેને સંપૂર્ણપણે ઓગળવું જોઈએ, અને તેનો ઉપયોગ કરતા પહેલા તેને સારી રીતે ભળી દો.
બોવાઇન સીરમ આલ્બ્યુમિન(બોવાઇન આલ્બ્યુમિન, BSA)
મોલેક્યુલર રસાયણશાસ્ત્રના પ્રયોગોમાં, બોવાઇન સીરમ આલ્બ્યુમિન એ ખૂબ જ સામાન્ય ઉમેરણ છે, ખાસ કરીને પ્રતિબંધ એન્ઝાઇમ પાચન અને પીસીઆર પ્રયોગોમાં.PCR પ્રતિક્રિયાઓમાં, BSA ફેનોલિક સંયોજનો જેવા દૂષકોને ઘટાડવામાં મદદરૂપ થાય છે.અને એવું પણ કહેવાય છે કે તે ટેસ્ટ ટ્યુબની દીવાલ પર પ્રતિક્રિયા કરનારાઓના સંલગ્નતાને ઘટાડી શકે છે.PCR પ્રતિક્રિયામાં, સામાન્ય રીતે ઉમેરવામાં આવેલ BSA ની સાંદ્રતા 0.8 mg/ml સુધી પહોંચી શકે છે.
 
સંબંધિત વસ્તુઓ:
પીસીઆર હીરો(રંગ સાથે)
પીસીઆર હીરો