પીસીઆર પ્રતિક્રિયાની ઉત્કૃષ્ટ વિશેષતા તેની વિશાળ એમ્પ્લીફિકેશન ક્ષમતા અને અત્યંત ઉચ્ચ સંવેદનશીલતા છે.PCR પ્રદર્શન અને શોધ કાર્યક્ષમતામાં સુધારો કરવા માટે, અમે PCR એમ્પ્લીફિકેશન ક્ષમતા અને તપાસ સંવેદનશીલતા સુધારવા માટે પ્રતિબદ્ધ છીએ, પરંતુ માથાનો દુખાવો પ્રયોગની પ્રક્રિયામાં છે.ખોટા હકારાત્મક ઘણીવાર જોવા મળે છે, અને ખૂબ જ ઓછી માત્રામાં સેમ્પલ ક્રોસ-દૂષણ અથવા પીસીઆર પ્રોડક્ટ દૂષણ પ્રયોગમાં ખોટા હકારાત્મકનું કારણ બની શકે છે.
પાંચ પ્રકારના પીસીઆર ઉત્પાદન દૂષણ
પીસીઆર દૂષિત થવાના ઘણા કારણો છે, જેને આશરે નીચેની શ્રેણીઓમાં વિભાજિત કરી શકાય છે:
નમૂનાનું દૂષણ મુખ્યત્વે નમૂનો એકત્રિત કરવા માટેના કન્ટેનરના દૂષણને કારણે થાય છે, અથવા જ્યારે નમૂનો મૂકવામાં આવે છે, ત્યારે તે છૂટક સીલિંગને કારણે કન્ટેનરમાંથી બહાર નીકળી જાય છે, અથવા નમૂનો કન્ટેનરની બહારના ભાગમાં વળગી રહે છે, જે ક્રોસ-દૂષણનું કારણ બને છે;દૂષિતતા નમૂનાઓ વચ્ચે દૂષણ તરફ દોરી જાય છે;કેટલાક માઇક્રોબાયલ નમુનાઓ, ખાસ કરીને વાયરસ, એરોસોલથી ફેલાઈ શકે છે અથવા એરોસોલ બનાવી શકે છે, જેના પરિણામે પરસ્પર દૂષણ થાય છે.
તેનું મુખ્ય કારણ એ છે કે પીસીઆર રીએજન્ટની તૈયારી દરમિયાન સેમ્પલ ગન, કન્ટેનર, ડબલ ડિસ્ટિલ્ડ વોટર અને અન્ય સોલ્યુશન પીસીઆર ન્યુક્લીક એસિડ ટેમ્પલેટ દ્વારા દૂષિત થાય છે.
મોલેક્યુલર બાયોલોજી પ્રયોગશાળાઓ અને કેટલીક પ્રયોગશાળાઓમાં જે ક્લોન કરેલા પ્લાઝમિડનો હકારાત્મક નિયંત્રણો તરીકે ઉપયોગ કરે છે, ક્લોન કરેલા પ્લાઝમિડ દૂષણની સમસ્યા પણ સામાન્ય છે.કારણ કે એકમના જથ્થામાં ક્લોનિંગ પ્લાઝમિડની સામગ્રી ખૂબ ઊંચી છે, અને શુદ્ધિકરણ પ્રક્રિયામાં વધુ સાધનો અને રીએજન્ટ્સની જરૂર છે, અને જીવંત કોષોમાં પ્લાઝમિડ જીવંત કોષોની મજબૂત વૃદ્ધિ અને પ્રજનન ક્ષમતાને કારણે દૂષિત થવાની સંભાવના છે.
એમ્પ્લીફાઇડ ઉત્પાદનોનું દૂષણ એ પીસીઆર પ્રતિક્રિયાઓમાં સૌથી સામાન્ય દૂષિત સમસ્યા છે.કારણ કે પીસીઆર ઉત્પાદનની નકલની માત્રા મોટી છે (સામાન્ય રીતે 1013 નકલો/એમએલ), જે પીસીઆર શોધ નકલ નંબરની મર્યાદા કરતાં ઘણી વધારે છે, ખૂબ જ ઓછી માત્રામાં પીસીઆર ઉત્પાદન દૂષણ ખોટા હકારાત્મક કારણ બની શકે છે.
એરોસોલ પ્રદૂષણ એ પીસીઆર ઉત્પાદનોના દૂષણનું સૌથી સંભવિત સ્વરૂપ છે, અને તેની અવગણના કરવી પણ સૌથી સરળ છે.તે પ્રવાહી સપાટી અને હવા વચ્ચેના ઘર્ષણ દ્વારા રચાય છે.સામાન્ય રીતે, જ્યારે ઢાંકણ ખોલવામાં આવે છે, જ્યારે નમૂનાને એસ્પિરેટ કરવામાં આવે છે, અથવા જ્યારે પ્રતિક્રિયા ટ્યુબ જોરશોરથી હલાવવામાં આવે ત્યારે પણ એરોસોલ દૂષણ રચાય છે.ગણતરીઓ અનુસાર, એક એરોસોલ કણોમાં 48,000 નકલો હોઈ શકે છે, તેથી તેના કારણે થતું પ્રદૂષણ એ એક સમસ્યા છે જે વિશેષ ધ્યાન આપવાની પાત્ર છે.
ખાસ કરીને, પરીક્ષણ પ્રયોગશાળાઓ ઘણીવાર ચોક્કસ જનીનને ચકાસવા માટે પ્રાઇમરની સમાન જોડીનો ઉપયોગ કરે છે.સમય જતાં, પ્રયોગશાળાની જગ્યામાં મોટી માત્રામાં પીસીઆર ઉત્પાદનનું દૂષણ થશે.એકવાર આ પ્રકારનું દૂષણ થઈ જાય, તો તેને ટૂંકા સમયમાં દૂર કરવું મુશ્કેલ છે.
પ્રથમ ત્રણ પ્રકારના પ્રદૂષણ માટે, અમે ટાળવા માટે અસરકારક માધ્યમોનો ઉપયોગ કરી શકીએ છીએ, પરંતુ PCR ઉત્પાદનો દ્વારા થતા પ્રદૂષણને અટકાવવું મુશ્કેલ છે, ખાસ કરીને બિન-માનક PCR પ્રયોગશાળાઓના નિર્માણમાં.પીસીઆર પ્રક્રિયામાં, જ્યારે પીપેટની ટીપ પ્રવાહીને ચૂસે છે અને ફૂંકાય છે, અને પીસીઆર ટ્યુબ કવર ખોલવામાં આવે છે, ત્યારે એરોસોલ બનાવવામાં આવશે.એરોસોલ (એક એરોસોલ હજારો ડીએનએ વહન કરી શકે છે) દ્વારા વહન કરેલા ડીએનએ પરમાણુઓને દૂર કરવા મુશ્કેલ છે કારણ કે તેઓ હવામાં તરતા હોય છે.એકવાર પીસીઆર પ્રયોગોના આગલા રાઉન્ડની રજૂઆત થઈ જાય, પછી ખોટા હકારાત્મક અનિવાર્યપણે થશે.
નીચેની આકૃતિમાં બતાવ્યા પ્રમાણે, નકારાત્મક નિયંત્રણે રસના અનુરૂપ બેન્ડને પણ વિસ્તૃત કર્યું છે:
PCR પ્રદૂષણ અને નિવારણના આ અંકનો પ્રથમ ભાગ અહીં રજૂ કરવામાં આવ્યો છે.હવે પછીનો અંક તમારા માટે બીજો ભાગ "PCR ઉત્પાદન દૂષણ નિવારણ" લાવશે, તેથી ટ્યુન રહો!
પોસ્ટ સમય: જુલાઈ-25-2017
