તમે કેટલું જાણો છો

વિશે એનયુક્લિક એસિડ નિષ્કર્ષણ

શુદ્ધ ન્યુક્લીક એસિડની શરૂઆત અને અંત

શરૂઆતમાં બધું જ મુશ્કેલ છે, શુદ્ધ ન્યુક્લિક એસિડ સૌથી વધુ છે

અનુગામી પ્રયોગો માટે, પરમાણુ પ્રયોગોની શરૂઆત

સફળતા કે નિષ્ફળતાની નિર્ણાયક અસર હોય છે.

ટ્રેસ/અલ્ટ્રા-ટ્રેસ યુવી સ્પેક્ટ્રોફોટોમીટર ઘણા વૈજ્ઞાનિક સંશોધકો દ્વારા પસંદ કરવામાં આવે છે કારણ કે તે ન્યુક્લીક એસિડની સાંદ્રતા અને પ્રોટીન અને મીઠું આયન અવશેષો સરળતાથી, ઝડપથી અને આર્થિક રીતે શોધી શકે છે.

જેમ આપણે બધા જાણીએ છીએ, A260 એટલે ન્યુક્લીક એસિડ શોષક OD મૂલ્ય, A280 એટલે પ્રોટીન સાંદ્રતા શોષક OD મૂલ્ય, A230 એટલે મીઠું આયન સાંદ્રતા શોષક OD મૂલ્ય, તેથી A260 ન્યુક્લીક એસિડ સાંદ્રતાને રૂપાંતરિત કરી શકે છે, A260/280 એટલે પ્રોટીન અવશેષો, A260/260 સંશોધન દ્વારા માત્ર ક્ષાર, ક્ષાર, 260/260 પર આધારિત છે. મોટી સંખ્યામાં માપન પરિણામો પર, અને તે છે "પરંપરાગત” માનવું કે તે ડીએનએ અને આરએનએની શુદ્ધતા સમજાવી શકે છેચોક્કસ હદ સુધી.ન્યુક્લિક એસિડ ઉપજ અને શુદ્ધતાની ઓળખ માટે તે એકમાત્ર ધોરણ નથી, તેનો ઉપયોગ ફક્ત સંદર્ભ તરીકે થાય છે, અને તે "ગોલ્ડ સ્ટાન્ડર્ડ" નથી.

થર્મો ફિશર ND-2000 મેન્યુઅલ પરીક્ષણ પરિણામોની વિશ્વસનીયતા પર ભાર મૂકે છે

કારણ એ છે કે માઇક્રો/અલ્ટ્રામાઇક્રો યુવી સ્પેક્ટ્રોફોટોમીટરનો ઉપયોગ કરીને મેળવેલા પરિણામો માત્ર બાજુથી ન્યુક્લીક એસિડની ઉપજ અને શુદ્ધતાને પ્રતિબિંબિત કરે છે, અને ત્યાં ઘણા પ્રભાવિત પરિબળો છે (ઓપ્ટિકલ પાથ, નમૂનાનું પ્રમાણ, નમૂના એકાગ્રતા, pH મૂલ્ય, અન્ય આયનો જે શોષણ માપનને અસર કરે છે, વગેરે) , OD મૂલ્ય આવશ્યકપણે માપવામાં આવતું નથી.તે જ સમયે, શોષક મૂલ્ય નિર્ધારણ સામગ્રીની વિશિષ્ટતાના અભાવને કારણે, સિંગલ-સ્ટ્રેન્ડેડ DNA, ડબલ-સ્ટ્રેન્ડેડ DNA, RNA, dNTPs અને કેટલાક પ્રોટીન બધામાં 260nm તરંગલંબાઇ પર શોષણની ટોચ હોય છે, અને એકલા A260 દ્વારા નિર્ધારિત સાંદ્રતા જરૂરી નથી કે વાસ્તવિક DNA DNA હોય.એકાગ્રતા, અને તેની અખંડિતતા અને અધોગતિનો નિર્ણય કરી શકાતો નથી.

તો આપણા શુદ્ધ ન્યુક્લીક એસિડની ગુણવત્તા કેવી રીતે નક્કી કરવી?તપાસ માટે માઇક્રો/અલ્ટ્રામાઇક્રો યુવી સ્પેક્ટ્રોફોટોમીટરનો ઉપયોગ કરવા ઉપરાંત, ન્યુક્લીક એસિડની શુદ્ધતા અને અખંડિતતાને દૃષ્ટિની રીતે પ્રદર્શિત કરવા અને અમુક હદ સુધી સાંદ્રતા દર્શાવવા માટે એગેરોઝ જેલ ઇલેક્ટ્રોફોરેસીસ જેવી પદ્ધતિઓ પણ જરૂરી છે.આ રીતે, વિવિધ પદ્ધતિઓના શોધ પરિણામોમાંથી મેળવેલ ન્યુક્લિક એસિડ ઉપજ અને શુદ્ધતા વિશ્વસનીય છે.

પ્રાયોગિક ચાર્ટ સરખામણી

H1299 કોશિકાઓના જીનોમિક ડીએનએને કંપની A ની ડીએનએ એક્સ્ટ્રેક્શન કીટનો ઉપયોગ કરીને કાઢવામાં આવ્યું હતું, અને નોંધપાત્ર અશુદ્ધતા દૂષણ જોવા મળ્યું હતું, જેના પરિણામે ઉચ્ચ OD મૂલ્યો જોવા મળ્યા હતા.

(OD માપન મૂલ્ય અને અનુરૂપ ઇલેક્ટ્રોફેરોગ્રામ)

મૂલ્યાંકન સૂચકાંક

શું ન્યુક્લીક એસિડ ઉપજ અને ગુણવત્તા પરીક્ષણ માટે "ગોલ્ડ સ્ટાન્ડર્ડ" છે?

જ્યાં સુધી આપણે જાણીએ છીએ, ત્યાં કોઈ સરળ, ઝડપી અને સસ્તી પદ્ધતિ નથી.ભલે તે સ્પેક્ટ્રોફોટોમીટર હોય, જેલ ઇલેક્ટ્રોફોરેસીસ હોય અથવા માસ સ્પેક્ટ્રોમેટ્રી હોય, તે બધા વિવિધ પાસાઓથી ઉકેલમાં ન્યુક્લીક એસિડની સાંદ્રતા અને શુદ્ધતાને પ્રતિબિંબિત કરે છે, અને તેમને એકબીજાનો ઉલ્લેખ કરીને નક્કી કરવાની જરૂર છે.

શ્રેષ્ઠ મૂલ્યાંકન સૂચકાંક હંમેશા છેફોલો-અપ પ્રાયોગિક એપ્લિકેશન.તે રિવર્સ ટ્રાન્સક્રિપ્શન અને પીસીઆર એમ્પ્લીફિકેશનની કાર્યક્ષમતાને અસર કરતું નથી.ભરોસાપાત્ર એમ્પ્લીફિકેશન પ્રોડક્ટ્સ અને Ct મૂલ્યો મેળવવું અને અનુક્રમ દ્વારા સંપૂર્ણ ક્રમ મેળવવો એ સફળ ન્યુક્લિક એસિડ નિષ્કર્ષણ છે.

સારાંશમાં, ગુણોત્તર-માત્ર સિદ્ધાંતના દૃષ્ટિકોણને "સારા નિષ્કર્ષણ પરિમાણો તરીકે સારા ડાઉનસ્ટ્રીમ પ્રાયોગિક પરિણામોનો ઉપયોગ" ના દૃષ્ટિકોણ દ્વારા પડકારવામાં આવવો જોઈએ!

ઉચ્ચ ડીએનએ/આરએનએ શુદ્ધતા મેળવવા માટે ભલામણ કરેલ ફોરજીન ડીએનએ આરએનએ નિષ્કર્ષણ કીટ:

https://www.foreivd.com/reagent/dna-isolation-series/

https://www.foreivd.com/reagent/rna-isolation-series/