ગુંદર પુનઃપ્રાપ્તિ સુધારવા માટે ટિપ્સ

1. ઇલેક્ટ્રોફોરેસીસ દરમિયાન નમૂના લોડ વધારો.

2. તાજી તૈયાર ઇલેક્ટ્રોફોરેસીસ બફરનો ઉપયોગ કરો.

3. ગુંદર કાપતી વખતે, ગુંદર કાપવાની માત્રા ઘટાડવા માટે માત્ર સ્ટ્રીપ્સ સાથે ગુંદર કાપવાનો પ્રયાસ કરો: થોડા હેતુવાળા ટુકડાઓ સાથે ગુંદરની જરૂર નથી, અન્યથા તે પુનઃપ્રાપ્તિ દરને અસર કરશે.

4. ગુંદરના બે અથવા વધુ ટુકડાઓ ઓગાળ્યા પછી, વોલ્યુમ ગમે તેટલું મોટું હોય તો પણ ટ્યુબનો ઉપયોગ કરો અને તેને સમાન સ્તંભમાં સ્થાનાંતરિત કરો.

5. સોલમાં ઉમેરવામાં આવેલું સોલ્યુશન થોડું વધારે હોઈ શકે છે, જે પટલમાં ડીએનએને જોડવા માટે વધુ અનુકૂળ છે, પરંતુ સામાન્ય રીતે 750ul કરતાં વધુ નથી.

6. જેલ પુનઃપ્રાપ્તિ માટેની ચાવી એ કોલમમાં મીઠાની સાંદ્રતા, એસિડિટી (ચાર્જ) અને દ્રાવણની હાઇડ્રોફોબિસીટી દ્વારા કોલમ સાથે ડીએનએને જોડવાનું છે.તેથી, જો ઇલેક્ટ્રોફોરેસીસ બફરનું pH ખૂબ વધારે હોય, તો 10ul (pH 5.0, 3mol/L NaAC) સોલમાં ઉમેરી શકાય છે;પટલ પર ડીએનએ પરમાણુઓને વધુ સારી રીતે અટકાવવા માટે, 30% આઇસોપ્રોપેનોલને ગુંદર ઓગાળીને પ્રવાહીમાં ગરમીમાં ઉમેરી શકાય છે.

7. એલ્યુએન્ટ ઉમેરતા પહેલા, ઇથેનોલને સંપૂર્ણપણે બાષ્પીભવન કરવા માટે થોડી મિનિટો (લગભગ 10 મિનિટ) માટે ઓરડાના તાપમાને સ્તંભને છોડી દો.

8. છેલ્લે, પુનઃપ્રાપ્તિ વોલ્યુમ ઘટાડવા માટે ઓછું એલ્યુએન્ટ ઉમેરો.સામાન્ય રીતે, 30-50μl ઇલ્યુએન્ટનો ઉપયોગ ઇલ્યુશન માટે થાય છે (ખૂબ ઓછું નહીં, અન્યથા તે પટલને ભીનું કરી શકશે નહીં, જે ઉત્સર્જન માટે અનુકૂળ નથી);પટલ સાથે બંધાયેલા ડીએનએને સંપૂર્ણ રીતે દૂર કરવા માટે ઉત્સર્જનના ટીપાં પટલની મધ્યમાં હોય છે.

9. એલ્યુએન્ટ ઉમેર્યા પછી, તેને 55 ડિગ્રીના વોટર બાથમાં 5 મિનિટ માટે એલ્યુટ કરી શકાય છે અથવા 50 ડિગ્રીના વોટર બાથમાં 10 મિનિટથી વધુ સમય માટે મૂકી શકાય છે, અથવા રાતોરાત 4 ડિગ્રી પર પેરાફિલમથી સીલ કરી શકાય છે, અને પછી બીજા દિવસે પુનઃપ્રાપ્તિ માટે સેન્ટ્રીફ્યુજ કરી શકાય છે, અસર સારી છે.

10. સેન્ટ્રીફ્યુજ્ડ એલ્યુએટને શોષણ સ્તંભમાં પાછા ઉમેરો અને ફરીથી સેન્ટ્રીફ્યુજ કરો.

PCR ઉત્પાદન પુનઃપ્રાપ્તિ માટે વિગતવાર પદ્ધતિઓ અને પ્રક્રિયાઓ

1. સામાન્ય રબર રિસાયક્લિંગ

જો તમે ગુંદરને પુનઃપ્રાપ્ત કરવા માંગતા હો, તો કીટનો ઉપયોગ કરવો શ્રેષ્ઠ છે, જે અનુકૂળ છે અને તેનો પુનઃપ્રાપ્તિ દર થોડો વધારે છે.જો તમારે તેને મેન્યુઅલી પુનઃપ્રાપ્ત કરવાની જરૂર હોય, તો તમે ગુંદર કાપ્યા પછી TE ના 3 ગણા વોલ્યુમ ઉમેરી શકો છો.પાણીના સ્નાનમાં ઓગળ્યા પછી, ફિનોલ, ફિનોલ/ક્લોરોફોર્મ સાફ રીતે કાઢવામાં આવે છે, અને ઇથેનોલને અવક્ષેપિત કરવામાં આવે છે.બસ આ જ.

2. નીચા ગલનબિંદુ જેલમાંથી ડીએનએ પુનઃપ્રાપ્તિ

ડીએનએ ટુકડાઓનું શુદ્ધિકરણ જેલના જથ્થાના બરાબર TE (10 mmol/l Tris-HCl pH8.0, 0.1 mmol/l EDTA) ઉમેરો અને જેલને સંપૂર્ણપણે ઓગળી જવા માટે 5 મિનિટ માટે 65°C પાણીના સ્નાનમાં મૂકો.

તેને ઓરડાના તાપમાને લાવવામાં આવ્યા પછી, સમાન માત્રામાં ફિનોલ (TE સાથે સંતૃપ્ત, TE ઉપલા સ્તરમાં સીલ કરવામાં આવ્યું હતું, અને ફિનોલનું નીચેનું સ્તર દૂર કરવામાં આવ્યું હતું) ઉમેરવામાં આવ્યું હતું, અને મિશ્રણને હળવાશથી મિશ્રિત કરવામાં આવ્યું હતું (મિશ્રણની જરૂર નથી), અને 3 મિનિટ માટે 12,000 rpm પર સેન્ટ્રીફ્યુજ કરવામાં આવ્યું હતું.1-2 વખત પુનરાવર્તન કરો.

સુપરનેટન્ટ લો, 3mol/L સોડિયમ એસિટેટ (pH 5.2) નું 0.1 વોલ્યુમ અને સંપૂર્ણ ઇથેનોલના 2.5 ગણા વોલ્યુમ ઇથેનોલ અવક્ષેપ કરવા માટે ઉમેરો.શુદ્ધ ડીએનએને યોગ્ય માત્રામાં TE સાથે ઓગાળો, સામગ્રીને માપો અને ઉપયોગ માટે તૈયાર કરો (તેનો ઉપયોગ લક્ષ્ય જનીન માળખું વિશ્લેષણ, ચકાસણીની તૈયારી વગેરે માટે થઈ શકે છે).

3. સારી એમ્પ્લીફિકેશન વિશિષ્ટતા સાથે પીસીઆર પુનઃપ્રાપ્તિ

જો પીસીઆર એમ્પ્લીફિકેશનની વિશિષ્ટતા સારી છે, તો તે પીસીઆર ઉત્પાદનનું એક સરળ શુદ્ધિકરણ અને પુનઃપ્રાપ્તિ છે.તમે PCR ઉત્પાદનમાં 50ug/ml પ્રોટીનનેઝ K ઉમેરી શકો છો, 1h માટે 37 ડિગ્રી, ફિનોલ/ક્લોરોફોર્મ સાથે એકવાર અર્ક, ક્લોરોફોર્મ સાથે એકવાર અર્ક અને સુપરનેટન્ટનું 0.1 વોલ્યુમ ઉમેરી શકો છો.નિરપેક્ષ ઇથેનોલના 2.5 વોલ્યુમો સાથે વરસાદ દ્વારા સોડિયમ એસિટેટ પુનઃપ્રાપ્ત કરવામાં આવ્યું હતું.

સંબંધિત વસ્તુઓ:

https://www.foreivd.com/pcr-purification-kit-2-product/

https://www.foreivd.com/blood-superdirecttm-pcr-kit-edta-product/