RNase એક સંવેદનશીલ શબ્દ છે જે ઘણા વિદ્યાર્થીઓ જેઓ વારંવાર RNA નિષ્કર્ષણ પ્રયોગો કરે છે તેઓ સાંભળવા માંગતા નથી.સંપૂર્ણપણે સશસ્ત્ર, આરએનએ કે જે અંતે અત્યંત ઝેરી રીએજન્ટ્સ ફિનોલ અને ક્લોરોફોર્મ સાથે કાઢવામાં આવ્યું હતું તે અધોગતિ પામ્યું હતું.હું સમાધાન કરતો નથી!!!આજે, ચાલો પ્રખ્યાત Rnase ના મૂળ પર એક નજર કરીએ.

રિબોન્યુક્લીઝ (RNase), અથવા RNase, એક ન્યુક્લિઝ છે જે RNA ને નાના અણુઓમાં હાઇડ્રોલાઈઝ કરી શકે છે.RNase, નાના પરમાણુ પ્રોટીન તરીકે, અસામાન્ય રીતે સ્થિર છે .પરંપરાગત ઉચ્ચ તાપમાન અને ઉચ્ચ દબાણ વરાળ વંધ્યીકરણ અને પ્રોટીન અવરોધકો તેને સંપૂર્ણપણે નિષ્ક્રિય કરી શકતા નથી.RNase ની સ્થિરતા મુખ્યત્વે બંધારણમાંના ડાયસલ્ફાઇડ બોન્ડમાંથી આવે છે.ઉદાહરણ તરીકે, બોવાઇન સ્વાદુપિંડના સામાન્ય રીતે ઉપયોગમાં લેવાતા RNaseમાં માત્ર 124 એમિનો એસિડ હોય છે, પરંતુ તેમાં 4 ડિસલ્ફાઇડ બોન્ડ હોય છે.સલ્ફર બોન્ડ અને ડાઈસલ્ફાઈડ બોન્ડ RNase ને ઉત્તમ થર્મલ સ્થિરતા આપે છે.વધુમાં, rnase પ્રમાણમાં નાનું પરમાણુ વજન ધરાવે છે અને ઘણા કિસ્સાઓમાં તેની મૂળ રચનાને ઝડપથી પુનઃસ્થાપિત કરી શકે છે.

અત્યંત સ્થિર હોવા ઉપરાંત,RNases પ્રયોગશાળામાં સર્વવ્યાપક છે .RNase એ જૈવિક સંરક્ષણ પદ્ધતિ છે.કોષ માટે, એક્ઝોજેનસ આરએનએ ઘણીવાર જીવલેણ હોય છે.એક્ઝોજેનસ ડીએનએની તુલનામાં, એક્સોજેનસ આરએનએ ઘણીવાર વધુ જોખમી હોય છે.આરએનએ ખુશીથી લખવામાં આવે છે અને અનુવાદિત થાય છે, તેથી લગભગ તમામ સજીવોએ એક્સોજેનસ આરએનએના આક્રમણ સામે રક્ષણ આપવા માટે આરનેઝનો વિકાસ કર્યો છે.તેથી, પ્રયોગશાળામાં ઉગાડવામાં આવેલા બેક્ટેરિયલ કોષો અને તમે જેઓ આરએનએ કાઢો છો તેઓ RNase ની સુગંધ બહાર કાઢે છે.માનવ શરીરના પ્રવાહી (લાળ, આંસુ, વગેરે) માં મોટી માત્રામાં RNase હોય છે, તેથી જ્યારે RNA ક્ષીણ થાય ત્યારે રડશો નહીં.તમે જેટલું વધુ રડશો, તેટલું ખરાબ આરએનએ ડિગ્રેડેશન!!બહેન દૈયુ આરએનએ નિષ્કર્ષણ માટે યોગ્ય નથી!

આ ઉપરાંત, તમારી નાજુક ત્વચામાં પણ ઘણો RNase હોય છે, અને માર્કર્સ, પિપેટ્સ, રેફ્રિજરેટરના દરવાજા અને ડોર હેન્ડલ્સ કે જેને ત્વચા દ્વારા સ્પર્શ કરવામાં આવ્યો હોય તેમાં પણ RNase હોય છે.

આટલી બધી દોડધામ સાથે, ચાલો એક નજર કરીએ RNases સાથે કેવી રીતે વ્યવહાર કરવો.

આરએનએ દૂર કરતી વખતે દરેક વ્યક્તિ જે વિચારે છે તે પ્રથમ વસ્તુ છેDEPC(ડાયથાઈલ પાયરોકાર્બોનેટ).DEPC મુખ્યત્વે RNase સક્રિય જૂથ હિસ્ટિડાઇનની ઇમિડાઝોલ રિંગ સાથે સંયોજન દ્વારા પ્રોટીનને વિકૃત કરે છે, ત્યાં એન્ઝાઇમની પ્રવૃત્તિને અટકાવે છે.0.1% DEPC Rnase પર વધુ સારી રીતે દૂર કરવાની અસર કરી શકે છે, પરંતુ આપણે ધ્યાન આપવાની જરૂર છે કે DEPC એ જાણીતું કાર્સિનોજન છે, તેથી તેનો ઉપયોગ કરતી વખતે વિશેષ ધ્યાન આપવું જોઈએ.

RNase માટે, આપણે બે પાસાઓથી શરૂઆત કરવાની જરૂર છે,પ્રથમ અંતર્જાત RNase ની પ્રવૃત્તિને અટકાવવાનું છે

પરંપરાગત RNA નિષ્કર્ષણ રીએજન્ટ જેમ કે ટ્રિઝોલમાં સમાયેલ ગ્વાનિડિન આઇસોથિયોસાયનેટ અને ડીટીટી RNase ના ડાયસલ્ફાઇડ બોન્ડ ખોલી શકે છે, પરંતુ હજુ પણ કેટલાક RNase છે, ખાસ કરીને પેશીના નમૂનાઓમાં, તેથી નીચા તાપમાન પર ધ્યાન આપો.

1.ટીશ્યુ સેમ્પલને બહાર કાઢ્યા પછી તરત જ પ્રવાહી નાઈટ્રોજનમાં અથવા વ્યાપારી આરએનએ પ્રિઝર્વેશન સોલ્યુશનમાં બોળી દો.

2.કોષના નમૂનાના આરએનએને બહાર કાઢ્યા પછી, તેને લિસિસ સોલ્યુશનમાં ઉમેરો અને તેને બરફના બોક્સ પર લીસ કરો.

3. ગ્રાઇન્ડીંગ માટે પ્રવાહી નાઇટ્રોજનનો ઉપયોગ કરવો શ્રેષ્ઠ છે જ્યારે પેશીના નમૂનાઓ એકરૂપ થાય છે.પ્રવાહી નાઇટ્રોજન વિના ઇલેક્ટ્રિક હોમોજેનાઇઝરનો ઉપયોગ કરતી વખતે, હોમોજેનેટ એડેપ્ટરને સંપૂર્ણપણે પૂર્વ-ઠંડક પર ધ્યાન આપો.

બીજો એક્ઝોજેનસ DNase છે

1.સંપૂર્ણ સશસ્ત્ર બનો, લેબ કોટ પહેરો, માસ્ક પહેરો, અને નવા ગ્લોવ્ઝની જોડી પહેરવાની ખાતરી કરો (આટલું કરકસર ન બનો!! એ નોંધવું જોઈએ કે ટ્રાઈઝોલ ખૂબ જ કાટરોધક છે, અને તે મોજા દ્વારા પણ ખૂબ જ મજબૂત છે, તેથી તમારા હાથ પર ટપકશો નહીં).

2.તમામ વપરાયેલ પીપેટ ટીપ્સ, EP ટ્યુબ, પીસીઆર ટ્યુબ અને અન્ય સાધનોની ડી-આરનેઝ ટ્રીટમેન્ટ થવી જોઈએ.તેને 0.1% DEPC માં પલાળી શકાય છે અને પછી ઉચ્ચ દબાણ હેઠળ દબાણ કરી શકાય છે.ફ્યુમ હૂડમાં ઓપરેશન પર ધ્યાન આપો.સ્થાનિક જુલમી લોકો ઉત્સેચકોને દૂર કરવા માટે સીધી ઉપભોજ્ય વસ્તુઓ ખરીદી શકે છે.

PS: ચાલો હું તમને એક આળસુ પદ્ધતિ કહું.જો કે ઉચ્ચ તાપમાન અને ઉચ્ચ દબાણ RNase સંપૂર્ણપણે દૂર કરી શકતા નથી, તે તેના મોટા ભાગને દૂર કરશે.ઉચ્ચ તાપમાન અને ઉચ્ચ દબાણની 2 ગણી સારી અસર થાય છે, અને આરએનએના નિષ્કર્ષણની થોડી અસર થાય છે.

3.આલ્કોહોલ પ્રોટીનને વિકૃત કરી શકે છે,તેથી RNA નિષ્કર્ષણ ટેબલ 75% આલ્કોહોલથી સાફ કરી શકાય છે , અને મોજા પર પણ દારૂનો છંટકાવ કરી શકાય છે.

4.અંતિમ આરએનએ ઓગળતા સોલ્યુશન અને સેન્ટ્રીફ્યુજ ટ્યુબની પણ ડી-આરનેઝ સારવાર થવી જોઈએ.DEPC પાણી એ સામાન્ય રીતે ઉપયોગમાં લેવાતું RNA ઓગળતું સોલ્યુશન છે.ચાલો DEPC પાણીની યોગ્ય તૈયારી પદ્ધતિ વિશે વાત કરીએ (જ્યારે તમે તેને ખરીદો ત્યારે વ્યાપારી DEPCને ફરીથી પેકેજ કરવાનું યાદ રાખો)

1:1000 પર અલ્ટ્રાપ્યોર પાણીમાં DEPC ઉમેરો, સારી રીતે હલાવો, 37°C પર રાતભર રહેવા દો, અને 121°C પર ઊંચા તાપમાન અને ઉચ્ચ દબાણ હેઠળ 15 મિનિટ માટે જંતુરહિત કરો.DEPC પાણીને 1ml એલીકોટ્સમાં -20°C પર સંગ્રહિત કરી શકાય છે.

છેલ્લે, સારાંશ માટે: નીચા તાપમાન એ ચાવી છે, ઉપભોક્તા વસ્તુઓ સારી રીતે સંચાલિત થાય છે, સંપૂર્ણ સશસ્ત્ર અને ઓછી વાતચીત!

ઠીક છે, તે આજની વ્યૂહરચના માટે છે.હું તમને બધી આરએનએ એકાગ્રતા અને શુદ્ધતા ઈચ્છું છું જેનો તમે ઉલ્લેખ કર્યો છે.A260/A280 બંને 2.0 છે!!!

અલબત્ત, જો તમે ઉપયોગ કરો છોઓરડાના તાપમાને ઓપરેશન આરએનએ નિષ્કર્ષણ કીટ, તમે ઉપરોક્ત મુશ્કેલીઓનો સામનો કરી શકતા નથી.

ઓરડાના તાપમાને, DNase ઉમેર્યા વિના, 11 મિનિટમાં કોષોમાંથી કુલ RNA કાઢે છે, અને 30 મિનિટમાં પ્રાણીની પેશીઓ અથવા છોડમાંથી કુલ RNA કાઢે છે.

ટ્રાયલ નમૂનાઓ માટે, કૃપા કરીને સંપર્ક કરો:overseas@foregene.com

સંબંધિત વસ્તુઓ:

https://www.foreivd.com/cell-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/animal-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/plant-total-rna/