સમસ્યાઓના વિશ્લેષણ માટે માર્ગદર્શિકાઓ

The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。

કોઈ આરએનએ કાઢી શકાતું નથી અથવા ન્યુક્લીક એસિડની ઉપજ ઓછી છે

સામાન્ય રીતે પુનઃપ્રાપ્તિ કાર્યક્ષમતાને અસર કરતા ઘણા પરિબળો હોય છે, જેમ કે: સેમ્પલ આરએનએ સામગ્રી, કામગીરીની પદ્ધતિ, ઇલ્યુશન વોલ્યુમ વગેરે..

સામાન્ય કારણોનું વિશ્લેષણ:

1. ઓપરેશન દરમિયાન બરફ સ્નાન અથવા નીચા-તાપમાન (4 ° સે) સેન્ટ્રીફ્યુગેશન.

સૂચન: ઓરડાના તાપમાને (15-25 ° સે) કામગીરી, ક્યારેય બરફ સ્નાન નહીં અને નીચા તાપમાન સેન્ટ્રીફ્યુજ.

2. અયોગ્ય નમૂના સંગ્રહ અથવા નમૂના સંગ્રહ ખૂબ લાંબા સમય માટે.

સૂચન: નમૂનાઓને -80 ° સે પર સ્ટોર કરો અથવા પ્રવાહી નાઇટ્રોજનમાં ફ્રીઝ કરો, અને ફ્રીઝ-થોનો વારંવાર ઉપયોગ ટાળો;RNA નિષ્કર્ષણ માટે તાજા એકત્રિત નમૂનાઓનો ઉપયોગ કરવાનો પ્રયાસ કરો.

3.અપર્યાપ્ત નમૂના lysis

ભલામણ: કૃપા કરીને ખાતરી કરો કે નમૂના અને કાર્યકારી સોલ્યુશન (લિનિયર એક્રેલામાઇડ) સારી રીતે મિશ્રિત કરવામાં આવ્યા છે અને ઓરડાના તાપમાને (15-25 ° સે) 10 મિનિટ માટે ઉકાળવામાં આવ્યા છે.

4. eluent ખોટી રીતે ઉમેરવામાં આવ્યું હતું

ભલામણ: ખાતરી કરો કે RNase-ફ્રી ddH2O શુદ્ધિકરણ કૉલમના પટલની મધ્યમાં ઉમેરવામાં આવે છે.

5. બફર viRW2 માં નિર્જળ ઇથેનોલનું અયોગ્ય પ્રમાણ

સૂચન: કૃપા કરીને સૂચનાઓનું પાલન કરો, બફર viRW2 માં નિર્જળ ઇથેનોલની સાચી માત્રા ઉમેરો અને કીટનો ઉપયોગ કરતા પહેલા તેને સારી રીતે ભળી દો.

6.અયોગ્ય નમૂનાનો ઉપયોગ.

સૂચન: બફર viRL ના 500μl દીઠ નમૂનાનું 200µl.વધુ પડતા નમૂનાના જથ્થાના પરિણામે RNA નિષ્કર્ષણ દરમાં ઘટાડો થશે.

7. અયોગ્ય ઉત્સર્જન વોલ્યુમ અથવા અપૂર્ણ ઉત્સર્જન.

સૂચન: શુદ્ધિકરણ સ્તંભનું એલ્યુએન્ટ વોલ્યુમ 30-50μl છે;જો ઉત્સર્જન અસર સંતોષકારક ન હોય, તો પ્રી-હીટેડ RNase-ફ્રી ddH ઉમેરવાની ભલામણ કરવામાં આવે છે.₂ઓ અને ઓરડાના તાપમાને મૂકવાનો સમય લંબાવો, જેમ કે 5-10 મિનિટ

8. બફર viRW2 માં કોગળા કર્યા પછી શુદ્ધિકરણ સ્તંભમાં ઇથેનોલ અવશેષો હોય છે.

સૂચન: જો બફર viRW2 માં કોગળા કર્યા પછી પણ ઇથેનોલ રહે છે અને 2 મિનિટ માટે ખાલી-ટ્યુબ સેન્ટ્રીફ્યુગેશન થાય છે, તો બાકીના ઇથેનોલને સંપૂર્ણપણે દૂર કરવા માટે ખાલી-ટ્યુબ સેન્ટ્રીફ્યુગેશન પછી શુદ્ધિકરણ કૉલમ ઓરડાના તાપમાને 5 મિનિટ માટે છોડી શકાય છે.

શુદ્ધ RNA અણુઓનું અધોગતિ

શુદ્ધ RNA ની ગુણવત્તા નમૂના સંગ્રહ, RNase દૂષણ અને કામગીરી જેવા પરિબળો સાથે સંબંધિત છે.

સામાન્ય કારણોનું વિશ્લેષણ:

1. એકત્ર કરાયેલા નમૂના સમયસર સાચવવામાં આવ્યા ન હતા.

સૂચન: જો નમૂનાનો સંગ્રહ કર્યા પછી સમયસર ઉપયોગ ન થાય, તો કૃપા કરીને તેને -80 ℃ અથવા પ્રવાહી નાઈટ્રોજન પર તરત જ સંગ્રહિત કરો.RNA અણુઓના નિષ્કર્ષણ માટે, જ્યારે પણ શક્ય હોય ત્યારે તાજા એકત્રિત નમૂનાઓનો ઉપયોગ કરવાનો પ્રયાસ કરો.

2. એકત્ર કરાયેલા નમૂનાઓ વારંવાર થીજી જતા અને પીગળતા હતા.

સૂચન: નમૂનાના સંગ્રહ અને સંગ્રહ દરમિયાન વારંવાર ઠંડું અને પીગળવાનું ટાળો (એક કરતાં વધુ નહીં), અન્યથા ન્યુક્લિક એસિડની ઉપજ ઘટશે.

3.RNase ઑપરેટિંગ રૂમમાં રજૂ કરવામાં આવ્યું હતું અથવા કોઈ નિકાલજોગ ગ્લોવ્સ, માસ્ક વગેરે પહેરવામાં આવ્યા ન હતા.

સૂચન: આરએનએ પરમાણુઓનું નિષ્કર્ષણ એક અલગ આરએનએ ઓપરેશન રૂમમાં શ્રેષ્ઠ રીતે કરવામાં આવે છે, અને પ્રયોગ પહેલાં પ્રાયોગિક કોષ્ટક સાફ કરવામાં આવે છે.પ્રયોગ દરમિયાન નિકાલજોગ ગ્લોવ્ઝ અને માસ્ક પહેરો જેથી આરએનએઝના પરિચયને કારણે થતા આરએનએ ડિગ્રેડેશનને ટાળી શકાય.

4. ઉપયોગ દરમિયાન રીએજન્ટ RNase દ્વારા દૂષિત થાય છે.

સૂચન: સંબંધિત પ્રયોગો માટે નવી વાઈરલ આરએનએ આઈસોલેશન કિટથી બદલો.

5. સેન્ટ્રીફ્યુજ ટ્યુબ, પીપેટ ટીપ્સ, વગેરેનું RNase દૂષણ. સૂચન: ખાતરી કરો કે સેન્ટ્રીફ્યુજ ટ્યુબ, પીપેટ ટીપ્સ અને પીપેટ બધા RNase-મુક્ત છે.

શુદ્ધ RNA અણુઓએ ડાઉનસ્ટ્રીમ પ્રયોગોને અસર કરી

શુદ્ધિકરણ સ્તંભ દ્વારા શુદ્ધ થયેલ આરએનએ અણુઓ ડાઉનસ્ટ્રીમ પ્રયોગોને અસર કરશે જો ત્યાં વધુ પડતા મીઠાના આયનો અથવા પ્રોટીન હોય, જેમ કે: રિવર્સ ટ્રાન્સક્રિપ્શન, નોર્ધન બ્લોટ, વગેરે..

1. એલ્યુટેડ આરએનએ પરમાણુઓમાં મીઠાના આયનો બાકી છે.

ભલામણ: ખાતરી કરો કે બફર viRW2 માં નિર્જળ ઇથેનોલનું યોગ્ય પ્રમાણ ઉમેરવામાં આવ્યું છે, અને ઑપરેટિંગ સૂચનાઓ પર યોગ્ય સેન્ટ્રીફ્યુગેશન ગતિ અનુસાર શુદ્ધિકરણ કૉલમને બે વાર ધોઈ લો; જો હજી પણ મીઠું આયનો બાકી હોય, તો તમે શુદ્ધિકરણ કૉલમમાં બફર viRW2 ઉમેરી શકો છો, અને તેને ઓરડાના તાપમાને 5 મિનિટ સુધી છોડી શકો છો.પછી મીઠું આયનોના દૂષણને સૌથી વધુ હદ સુધી દૂર કરવા માટે સેન્ટ્રીફ્યુગેશન કરો

2. એલ્યુટેડ આરએનએ અણુઓમાં ઇથેનોલ બાકી છે

સૂચન: બફર viRW2 દ્વારા શુદ્ધિકરણ સ્તંભોને ધોઈ નાખવામાં આવ્યા છે તેની ખાતરી કર્યા પછી, ઑપરેટિંગ સૂચનાઓ પર કેન્દ્રત્યાગી ગતિ અનુસાર ખાલી-ટ્યુબ સેન્ટ્રીફ્યુગેશન કરો.જો હજુ પણ ઇથેનોલ બાકી હોય, તો તેને ખાલી ટ્યુબ સેન્ટ્રીફ્યુગેશન પછી ઓરડાના તાપમાને 5 મિનિટ માટે છોડી શકાય છે જેથી બાકીના ઇથેનોલને મહત્તમ હદ સુધી દૂર કરી શકાય.

સૂચના માર્ગદર્શિકા:

વાયરલ આરએનએ આઇસોલેશન કીટ સૂચના માર્ગદર્શિકા