સમસ્યા વિશ્લેષણ માર્ગદર્શિકા

તમે જે સમસ્યાઓનો સામનો કરી શકો છો તેનું નીચેનું વિશ્લેષણપ્લાન્ટ કુલRNA extraction will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.

સ્પિન કૉલમ ભરાયેલા છે

સ્પિન કોલમના બ્લોકેજને કારણે RNA યીલ્ડમાં ઘટાડો થશે અથવા RNA મેળવવા માટે તેને શુદ્ધ કરવામાં પણ અસમર્થ બનશે, અને પ્રાપ્ત RNAની ગુણવત્તા ઓછી હશે.

સામાન્ય કારણ વિશ્લેષણ:

1. નમૂના સંપૂર્ણપણે ભાંગી નથી.

અપૂર્ણ સેમ્પલ ફ્રેગમેન્ટેશન ડીએનએ-ક્લીનિંગ કોલમને બ્લોક કરી શકે છે, જે આરએનએ ઉપજ અને ગુણવત્તાને પણ અસર કરી શકે છે.અમે ભલામણ કરીએ છીએ કે સેમ્પલ ફ્રેગમેન્ટેશન કરતી વખતે, શક્ય હોય ત્યાં સુધી કોષની દિવાલો અને કોષ પટલ જેવા પેશીઓને તોડવા માટે પ્રવાહી નાઇટ્રોજનની પૂરતી માત્રામાં ઝડપથી ગ્રાઇન્ડ કરો.પોલિફેનોલ પોલિસેકરાઇડ્સના છોડના નમૂનાઓ માટે, અમે ભલામણ કરીએ છીએ કે તમે પ્લાન્ટ ટોટલ આરએનએ આઇસોલેશન કિટ પ્લસનો ઉપયોગ કરો.

2. ડીએનએ-ક્લીનિંગ કોલમ આઇસોલેટેડ સુપરનેટન્ટને એસ્પિરેટ કરો, શક્ય કોષ ભંગાર પેલેટને એસ્પિરેટ કરો.

આરએનએ શોષણ પ્રક્રિયાઓ દરમિયાન એસ્પિરેટેડ સેલ ભંગાર પેલેટ RNA-માત્ર કૉલમને રોકી શકે છે (પ્રક્રિયાનું પગલું 5, પોલિસેકરાઇડ પોલિફેનોલ પ્રક્રિયાનું પગલું 6 જુઓ).અમે ભલામણ કરીએ છીએ કે કોષના ભંગાર ટાળવા માટે આ સુપરનેટન્ટને એસ્પિરેટ કરતી વખતે કાળજી લેવી જોઈએ.

3. નમૂનાની પ્રારંભિક રકમ ખૂબ મોટી છે.

સેમ્પલના વધુ પડતા ઉપયોગથી બફર PRL1 અથવા Buffer PSL1 દ્વારા કોષોના અપૂર્ણ સેમ્પલ ફ્રેગમેન્ટેશન અથવા અપૂર્ણ લિસિસમાં પરિણમશે, જેના પરિણામે શુદ્ધિકરણ કામગીરી માટે શુદ્ધિકરણ કોલમ ચોંટી જશે.પ્લાન્ટ ટોટલ આરએનએ આઇસોલેશન કીટમાં એક ઓપરેટેડ સેમ્પલના એક શુદ્ધિકરણ દીઠ પ્રારંભિક મહત્તમ 50 મિલિગ્રામ છે.પોલિફેનોલ પોલિસેકરાઇડ્સના છોડના નમૂનાઓ માટે, અમે ભલામણ કરીએ છીએ કે તમે પ્લાન્ટ ટોટલ આરએનએ આઇસોલેશન કિટ પ્લસનો પ્રયાસ કરો.

4. સેન્ટ્રીફ્યુજનું તાપમાન ખૂબ ઓછું છે.

નમૂના પેશીઓના પ્રવાહી નાઇટ્રોજન વિક્ષેપ સિવાય સંપૂર્ણ આરએનએ અલગતા અને શુદ્ધિકરણ, તમામ પગલાં ઓરડાના તાપમાને (20-25 ° સે) પર કરવામાં આવે છે.કેટલાક નીચા-તાપમાન સેન્ટ્રીફ્યુજીસનું તાપમાન 20 °C ની નીચે હોય છે, જે DNA-સફાઈ કૉલમ અને/અથવા RNA-માત્ર કૉલમમાં અવરોધ પેદા કરી શકે છે.જો આવું થાય, તો સેન્ટ્રીફ્યુજનું તાપમાન 20-25 °C પર સેટ કરો અને લિસિસ મિશ્રણ અને/અથવા ઇથેનોલ સેપરેશન સુપરનેટન્ટને 37 °C સુધી ગરમ કરો.

કોઈ આરએનએ કાઢવામાં આવ્યું નથી અથવા આરએનએ ઉપજ ઓછી નથી

સામાન્ય રીતે પુનઃપ્રાપ્તિ કાર્યક્ષમતાને અસર કરતા ઘણા પરિબળો હોય છે, જેમ કે: સેમ્પલ આરએનએ સામગ્રી, ઓપરેશન પદ્ધતિ, ઇલ્યુશન વોલ્યુમ વગેરે.

નીચે પ્રમાણે સામાન્ય કારણોનું વિશ્લેષણ:

1. ઓપરેશન દરમિયાન બરફ સ્નાન અથવા નીચા તાપમાન (4°C) સેન્ટ્રીફ્યુગેશન કરવામાં આવ્યું હતું.

સૂચન: આખી પ્રક્રિયામાં ઓરડાના તાપમાને (15-25°C) કામ કરો, બરફ સ્નાન અને નીચા તાપમાને સેન્ટ્રીફ્યુગેશન ન કરો.

       2.નમૂનાની અયોગ્ય જાળવણી અથવા નમૂનાની લાંબા ગાળાની જાળવણીને કારણે આરએનએનું અવક્ષય થયું છે.

ભલામણ: તાજા એકત્રિત નમૂનાઓ પ્રવાહી નાઇટ્રોજનમાં ઝડપથી સ્થિર થવું જોઈએ, અને પછી લાંબા સમય સુધી -80 ° સે પર સંગ્રહિત થવું જોઈએ, નમૂનાઓને વારંવાર ઠંડું અને પીગળવાનું ટાળો;અથવા તરત જ નમૂનાઓને RNA સ્ટેબિલાઇઝર RNAlater સોલ્યુશન (પ્રાણી નમૂનાઓ) માં પલાળી દો.

       3.અપર્યાપ્ત નમૂનાનું વિભાજન અને લિસિસ શુદ્ધિકરણ સ્તંભના અવરોધ તરફ દોરી જાય છે.

સૂચન: પેશીને ગ્રાઇન્ડ કરતી વખતે, કૃપા કરીને ખાતરી કરો કે પેશી પૂરતા પ્રમાણમાં ગ્રાઉન્ડ છે, અને તેને ઝડપથી પૂર્વ-તૈયાર બફર PSL1 પર સ્થાનાંતરિત કરો (પુષ્ટિ કરો કે β-ME નું સાચું પ્રમાણ ઉમેરવામાં આવ્યું છે, પ્રક્રિયાનું પગલું 1 જુઓ).

4. eluent ખોટી રીતે ઉમેરવામાં આવ્યું હતું.

સૂચન: ખાતરી કરો કે RNase-ફ્રી ddH₂O શુદ્ધિકરણ સ્તંભ પટલની મધ્યમાં ટપકવામાં આવે છે.

5. બફર PSL2 અથવા બફર PRW2 માં સંપૂર્ણ ઇથેનોલની સાચી માત્રા ઉમેરવામાં આવી ન હતી.

સૂચન: કૃપા કરીને સૂચનાઓનું પાલન કરો, Buffer PSL2 અને Buffer PRW2 માં સંપૂર્ણ ઇથેનોલની સાચી માત્રા ઉમેરો અને કીટનો ઉપયોગ થાય તે પહેલાં સારી રીતે ભળી દો.

6.પેશીના નમૂનાની માત્રા અયોગ્ય છે.

સૂચન: બફર PSL1 ના 500 μl દીઠ 50 મિલિગ્રામ પેશીનો ઉપયોગ કરો.વધુ પડતા પેશીનો ઉપયોગ કરવાથી કાઢવામાં આવેલ આરએનએનું પ્રમાણ ઘટશે અને પરિણામી આરએનએની શુદ્ધતા પણ ઘટી જશે.અમે ભારપૂર્વક ભલામણ કરીએ છીએ કે પ્રારંભિક નમૂનાની માત્રા RNA નિષ્કર્ષણ કામગીરી દીઠ 50 મિલિગ્રામથી વધુ ન હોવી જોઈએ.

7. અયોગ્ય ઇલ્યુશન વોલ્યુમ અથવા અપૂર્ણ ઇલ્યુશન.

સૂચન: શુદ્ધિકરણ સ્તંભનું એલ્યુએન્ટ વોલ્યુમ 50-200 μl છે;જો ઉત્સર્જન અસર સંતોષકારક ન હોય, તો પ્રીહિટેડ RNase-ફ્રી ddH ઉમેર્યા પછી ઓરડાના તાપમાને સમય વધારવાની ભલામણ કરવામાં આવે છે.₂ઓ, જેમ કે 5-10 મિનિટ.

8. બફર PRW2 સાથે ધોવા પછી શુદ્ધિકરણ સ્તંભમાં ઇથેનોલ અવશેષો હોય છે.

   સૂચન: જો ખાલી ટ્યુબને 1 મિનિટ માટે સેન્ટ્રીફ્યુગ કરવામાં આવે અને બફર PRW2 માં ધોવા પછી પણ ઇથેનોલ બાકી રહે, તો તમે ખાલી ટ્યુબના સેન્ટ્રીફ્યુગેશનનો સમય વધારીને 2 મિનિટ કરી શકો છો, અથવા બાકી રહેલા ઇથેનોલને સંપૂર્ણપણે દૂર કરવા માટે શુદ્ધિકરણ કૉલમને ઓરડાના તાપમાને 5 મિનિટ માટે મૂકી શકો છો.

9. કીટનો ઉપયોગ ખોટી રીતે થયો હતો.

   સૂચન: પોલિફેનોલિક પોલિસેકરાઇડ્સના છોડના નમૂનાઓ માટે, પ્લાન્ટ ટોટલ આરએનએ આઇસોલેશન કીટ જેવી સામાન્ય કીટનો ઉપયોગ કરીને આદર્શ આરએનએ નમૂનાઓ મેળવી શકાશે નહીં.અમે તમને પ્લાન્ટ ટોટલ આરએનએ આઇસોલેશનકિટ પ્લસનો ઉપયોગ કરવાની ભલામણ કરીએ છીએ, જે ખાસ કરીને પોલિફેનોલિક પોલિસેકરાઇડ પ્લાન્ટના નમૂનાઓ માટે રચાયેલ છે.પોલિફેનોલ અને પોલિસેકરાઇડ છોડના નમૂનાઓમાંથી આરએનએ કાઢવા માટે ખાસ વિકસિત કિટ.

OD260/OD280 મૂલ્ય ઓછું છે

ડીડીએચ સાથે આરએનએ ઉત્સર્જન₂O અને સ્પેક્ટ્રોફોટોમીટર રીડિંગ માટે વપરાયેલ OD260/OD280 મૂલ્યોમાં પરિણમે છે.અમે RNase-ફ્રી ddH ને બદલે 10 mM Tris-HCl, pH 7.5 નો ઉપયોગ કરવાની ભલામણ કરીએ છીએ₂O to elute RNA) પ્રમાણમાં યોગ્ય OD260/OD280 મૂલ્યો મેળવવા માટે, પૃષ્ઠ 19 પર "RNA એકાગ્રતા અને શુદ્ધિકરણ પરીક્ષણો" જુઓ.

શુદ્ધ થયેલ આરએનએ અધોગતિ પામે છે

શુદ્ધ RNA ની ગુણવત્તા નમૂનાની જાળવણી, RNase દૂષણ અને મેનીપ્યુલેશન જેવા પરિબળો સાથે સંબંધિત છે.

સામાન્ય કારણોનું વિશ્લેષણ:

1.પેશીના નમૂના સંગ્રહ કર્યા પછી સમયસર સંગ્રહિત કરવામાં આવ્યા ન હતા.

    ભલામણ: જો પેશીના નમૂનાઓ સંગ્રહ કર્યા પછી સમયસર ઉપયોગમાં લેવાતા ન હોય, તો કૃપા કરીને તેને નીચા તાપમાને તરત જ પ્રવાહી નાઇટ્રોજનમાં સંગ્રહિત કરો અથવા પ્રવાહી નાઇટ્રોજનમાં ઝડપી ઠંડું થયા પછી લાંબા ગાળાના સંગ્રહ માટે તેમને -80 ° સે પર સ્થાનાંતરિત કરો, અથવા તરત જ નમૂનાઓને RNA સ્ટેબિલાઇઝર RNAlater સોલ્યુશન (પ્રાણી નમૂનાઓ) માં નિમજ્જન કરો.RNA નિષ્કર્ષણ માટે, તાજા એકત્રિત પેશી નમૂનાઓનો ઉપયોગ કરવાનો પ્રયાસ કરો.

2. પેશીના નમૂનાઓનું વારંવાર ઠંડું અને પીગળવું.

   સૂચન: પેશીના નમૂનાઓનો સંગ્રહ કરતી વખતે, સાચવવા માટે તેમને નાના ટુકડાઓમાં કાપવા અને નમૂનાઓના વારંવાર થીજવા અને પીગળવાથી થતા આરએનએના અધોગતિને ટાળવા માટે તેનો ઉપયોગ કરતી વખતે તેમાંથી એક ભાગ કાઢવો શ્રેષ્ઠ છે.

3.RNase ઓપરેશન રૂમમાં રજૂ કરવામાં આવે છે અથવા ડિસ્પોઝેબલ ગ્લોવ્સ, માસ્ક વગેરે પહેર્યા નથી.

   સૂચન: RNA નિષ્કર્ષણના પ્રયોગો અલગ-અલગ RNA ઑપરેશન્સમાં શ્રેષ્ઠ રીતે કરવામાં આવે છે, અને પ્રયોગ પહેલાં પ્રયોગશાળાના ટેબલને સાફ કરવું જોઈએ, અને RNase ના પ્રવેશને કારણે RNA અધોગતિને ટાળવા માટે પ્રયોગ દરમિયાન નિકાલજોગ ગ્લોવ્સ અને માસ્ક પહેરવા જોઈએ.

4. રીએજન્ટ ઉપયોગ દરમિયાન RNase દ્વારા દૂષિત થાય છે.

   સૂચન: સંબંધિત પ્રયોગો માટે છોડની કુલ RNA નિષ્કર્ષણ કિટ્સની નવી શ્રેણી સાથે બદલો.

5. આરએનએ મેનીપ્યુલેશન માટે વપરાતી સેન્ટ્રીફ્યુજ ટ્યુબ અને પીપેટ ટીપ્સ RNase થી દૂષિત છે.

સૂચન: ખાતરી કરો કે આરએનએ નિષ્કર્ષણમાં વપરાતી સેન્ટ્રીફ્યુજ ટ્યુબ, પીપેટ ટીપ્સ, પાઈપેટ્સ વગેરે તમામ RNase-મુક્ત છે.

સૂચના માર્ગદર્શિકા:

પ્લાન્ટ ટોટલ આરએનએ આઇસોલેશન કીટ સૂચના માર્ગદર્શિકા