સેલ ડાયરેક્ટ RT qPCR કિટ-SYBR GREEN I ડાયરેક્ટ સેલ લિસિસ સેલ તૈયાર વન-સ્ટેપ qRT-PCR કિટ્સ
વર્ણનો
આ કિટ એક અનન્ય લિસિસ બફર સિસ્ટમનો ઉપયોગ કરે છે જે RT-qPCR પ્રતિક્રિયાઓ માટે સંસ્કારી કોષના નમૂનાઓમાંથી ઝડપથી RNA મુક્ત કરી શકે છે, જેનાથી સમય માંગી લેતી અને કપરી RNA શુદ્ધિકરણ પ્રક્રિયા દૂર થાય છે.આરએનએ ટેમ્પ્લેટ માત્ર 7 મિનિટમાં મેળવી શકાય છે.આ 5×ડાયરેક્ટ RT મિક્સ અને 2×કીટ દ્વારા પૂરા પાડવામાં આવેલ ડાયરેક્ટ qPCR મિક્સ-SYBR રીએજન્ટ ઝડપથી અને અસરકારક રીતે રીઅલ-ટાઇમ જથ્થાત્મક પીસીઆર પરિણામો મેળવી શકે છે.
5×ડાયરેક્ટ RT મિક્સ અને 2×ડાયરેક્ટ qPCR મિક્સ-SYBR મજબૂત અવરોધક સહિષ્ણુતા ધરાવે છે, અને નમૂનાઓના lysateનો ઉપયોગ RT-qPCR માટે સીધા નમૂના તરીકે કરી શકાય છે.આ કીટમાં અનન્ય આરએનએ હાઇ-એફિનિટી ફોરજીન રિવર્સ ટ્રાન્સક્રિપ્ટેસ અને હોટ ડી-ટાક ડીએનએ પોલિમરેઝ, ડીએનટીપી, એમજીસીએલ છે.2, પ્રતિક્રિયા બફર, પીસીઆર ઑપ્ટિમાઇઝર અને સ્ટેબિલાઇઝર.
વિશિષ્ટતાઓ
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
કીટ ઘટકો
| ભાગ I | બફર CL |
| ફોરજીન પ્રોટીઝ પ્લસ II | |
| બફર એસ.ટી | |
| ભાગ II | ડીએનએ ઇરેઝર |
| 5× ડાયરેક્ટ RT મિક્સ | |
| 2× ડાયરેક્ટ qPCR મિક્સ-SYBR | |
| 50× ROX સંદર્ભ ડાય | |
| RNase-મુક્ત ddH2O | |
| સૂચનાઓ | |
સુવિધાઓ અને ફાયદા
■સરળ અને અસરકારક : સેલ ડાયરેક્ટ આરટી ટેક્નોલોજી સાથે, આરએનએ સેમ્પલ માત્ર 7 મિનિટમાં મેળવી શકાય છે.
■ નમૂનાની માંગ ઓછી છે, 10 જેટલા ઓછા કોષોનું પરીક્ષણ કરી શકાય છે.
■ ઉચ્ચ થ્રુપુટ: તે ઝડપથી 384, 96, 24, 12, 6-વેલ પ્લેટમાં સંસ્કારી કોષોમાં આરએનએ શોધી શકે છે.
■ ડીએનએ ઇરેઝર રીલીઝ થયેલા જીનોમને ઝડપથી દૂર કરી શકે છે, ત્યારબાદના પ્રાયોગિક પરિણામો પરની અસરને મોટા પ્રમાણમાં ઘટાડી શકે છે.
■ ઑપ્ટિમાઇઝ્ડ RT અને qPCR સિસ્ટમ બે-પગલાં RT-PCR રિવર્સ ટ્રાંસ્ક્રિપ્શનને વધુ કાર્યક્ષમ અને PCR વધુ ચોક્કસ બનાવે છે, અને RT-qPCR પ્રતિક્રિયા અવરોધકોને વધુ પ્રતિરોધક બનાવે છે.
કીટ એપ્લિકેશન
એપ્લિકેશનનો અવકાશ: સંસ્કારી કોષો.
- સેમ્પલ લિસિસ દ્વારા બહાર પાડવામાં આવેલ RNA: આ કિટના RT-qPCR ટેમ્પલેટને જ લાગુ પડે છે.
- કીટનો ઉપયોગ નીચેના હેતુઓ માટે થઈ શકે છે: જનીન અભિવ્યક્તિ વિશ્લેષણ, siRNA- મધ્યસ્થી જનીન સાયલન્સિંગ અસરની ચકાસણી, દવાની તપાસ વગેરે.
ડાયાગ્રામ
સંગ્રહ અને શેલ્ફ જીવન
આ કીટનો ભાગ I 4℃ પર સંગ્રહિત થવો જોઈએ;ભાગ II -20℃ પર સંગ્રહિત થવો જોઈએ.
ફોરજીન પ્રોટીઝ પ્લસ II 4 પર સંગ્રહિત થવો જોઈએ℃, -20℃ પર સ્થિર થશો નહીં.
રીએજન્ટ 2×ડાયરેક્ટ qPCR મિક્સ-SYBR -20 પર સંગ્રહિત હોવું જોઈએ℃અંધારા માં;જો વારંવાર ઉપયોગ કરવામાં આવે, તો તે 4 પર પણ સંગ્રહિત કરી શકાય છે℃ ટૂંકા ગાળાના સ્ટોરેજ માટે (10 દિવસમાં ઉપયોગ કરો).
રીઅલ ટાઇમ પીસીઆર પ્રાઇમર ડિઝાઇન સિદ્ધાંતો
ફોરવર્ડ પ્રાઈમર અને રિવર્સ પ્રાઈમર
રીયલ ટાઈમ પીસીઆર માટે, પ્રાઈમર ડીઝાઈન ખૂબ જ મહત્વપૂર્ણ છે.પ્રાઇમર્સ પીસીઆર એમ્પ્લીફિકેશનની વિશિષ્ટતા અને કાર્યક્ષમતા સાથે સંબંધિત છે, અને નીચેના સિદ્ધાંતોના સંદર્ભમાં ડિઝાઇન કરી શકાય છે:
પ્રાઈમર લંબાઈ: 18-30bp.
GC સામગ્રી: 40-60%.
Tm મૂલ્ય: પ્રાઈમર ડિઝાઇન સોફ્ટવેર, જેમ કે પ્રાઈમર 5, પ્રાઈમરનું Tm મૂલ્ય આપી શકે છે.અપસ્ટ્રીમ અને ડાઉનસ્ટ્રીમ પ્રાઈમર્સના Tm મૂલ્યો શક્ય તેટલા નજીક હોવા જોઈએ.Tm ગણતરી સૂત્રનો પણ ઉપયોગ કરી શકાય છે: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).PCR કરતી વખતે, 5 °C ના પ્રાઈમર Tm મૂલ્યથી નીચેનું તાપમાન સામાન્ય રીતે એનેલિંગ તાપમાન તરીકે પસંદ કરવામાં આવે છે (એનીલિંગ તાપમાનમાં અનુરૂપ વધારો PCR પ્રતિક્રિયાની વિશિષ્ટતામાં વધારો કરી શકે છે).
પ્રાઇમર્સ અને પીસીઆર ઉત્પાદનો:
ડિઝાઇન પ્રાઈમર પીસીઆર એમ્પ્લીફિકેશન ઉત્પાદન લંબાઈ પ્રાધાન્ય 100-150bp છે.
નમૂનાના ગૌણ માળખાકીય વિસ્તારમાં ડિઝાઇન પ્રાઇમર્સ શક્ય તેટલું ટાળવું જોઈએ.
અપસ્ટ્રીમ અને ડાઉનસ્ટ્રીમ પ્રાઈમર્સના 3′ છેડા વચ્ચે 2 અથવા વધુ પૂરક પાયા બનાવવાનું ટાળો.
પ્રાઈમર 3′ ટર્મિનલ બેઝ 3 વધારાના સળંગ G અથવા C સાથે હાજર હોઈ શકતું નથી.
પ્રાઈમર્સમાં પૂરક રચનાઓ હોઈ શકતી નથી, અન્યથા હેરપિન સ્ટ્રક્ચર બનાવવામાં આવશે, જે પીસીઆર એમ્પ્લીફિકેશનને અસર કરશે.
ATCG પ્રાઈમર ક્રમમાં શક્ય તેટલું સમાનરૂપે વિતરિત કરવું જોઈએ, અને 3′ ટર્મિનલ બેઝને T તરીકે ટાળવું જોઈએ.
પરિશિષ્ટ 1: સેલ ડાયરેક્ટ RT-qPCR કિટ ઘટક પૂરક પેક
1.સેલ લિસિસ સોલ્યુશન
|
| |||
| કીટ ઘટકો (24-વેલ લિસિસ સિસ્ટમ / કૂવો) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 ટી | 500 ટી | ||
| ભાગઆઈ | બફર CL | 20 મિલી | 100 મિલી |
| ફોરજીન પ્રોટીઝ પ્લસ II | 400 μl | 1 મિલી × 2 | |
| બફર એસ.ટી | 1 મિલી × 2 | 10 મિલી | |
| ભાગII | ડીએનએ ઇરેઝર | 400 μl | 1 મિલી × 2 |
2.RT મિક્સ
|
| |
| કીટ ઘટકો (20 μl પ્રતિક્રિયા સિસ્ટમ) | DRT-01011-B1 |
| 200 ટી | |
| 5× ડાયરેક્ટ RT મિક્સ | 800 μl |
| RNase-મુક્ત ddH2O | 1.7 મિલી × 2 |
|
| ||
| કીટ ઘટકો (20 μl પ્રતિક્રિયા સિસ્ટમ) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200 ટી | 1000 ટી | |
| 2× ડાયરેક્ટ qPCR મિક્સ-SYBR | 1 મિલી × 2 | 1.7 મિલી × 6 |
| 50× ROX સંદર્ભ ડાય | 40 μl | 200 μl |
| RNase-મુક્ત ddH2O | 1.7 મિલી | 10 મિલી |
સૂચના માર્ગદર્શિકા:
