(96-વેલ) QuickEasy સેલ ડાયરેક્ટ RT-qPCR કિટ – તકમાન
વર્ણનો
આ(96-સારી) QuickEasyTM સેલ ડાયરેક્ટ RT-qPCR કિટ-તકમાનપૂરી પાડે છેએક અનન્ય લિસિસ બફર સિસ્ટમto ઝડપથી આરએનએ મુક્ત કરોસંસ્કારી કોષમાંથીRT-qPCR પ્રતિક્રિયાઓ માટે નમૂનાઓ, સમય માંગી લેનાર અને કપરું દૂર કરે છેઆરએનએ શુદ્ધિકરણ પ્રક્રિયા, અને જરૂરી આરએનએ ટેમ્પલેટ મેળવવા માટે માત્ર 7 મિનિટ લે છે.આ5× ડાયરેક્ટ RT મિક્સઅને2× ડાયરેક્ટ qPCR મિક્સ-SYBRબૉક્સમાં ઝડપથી પ્રદાન કરી શકાય છે અનેઅસરકારક રીતે રીઅલ-ટાઇમ જથ્થાત્મક મેળવોપીસીઆર પરિણામો.
5× ડાયરેક્ટ RT મિક્સ અને 2× ડાયરેક્ટ qPCR મિક્સ-ટાકમેન મજબૂત અવરોધક સહિષ્ણુતા ધરાવે છે, અને કાર્યક્ષમ રિવર્સ ટ્રાન્સક્રિપ્શન અને ચોક્કસ એમ્પ્લીફિકેશન માટે નમૂના તરીકે પરીક્ષણ કરવા માટે નમૂનાના લાઇસેટનો ઉપયોગ કરી શકે છે.રીએજન્ટમાં આરએનએ માટે ઉચ્ચ આકર્ષણ સાથે ફોરજીન યુનિક રિવર્સ ટ્રાન્સક્રિપ્ટેસ, તેમજ હોટ ડી-ટાક ડીએનએ પોલિમરેઝ, dNTPs, MgCl શામેલ છે.2 , પ્રતિક્રિયા બફર, પીસીઆર ઑપ્ટિમાઇઝર અને સ્ટેબિલાઇઝર, અને નમૂનાને ઝડપથી, સરળતાથી અને સચોટ રીતે શોધવા માટે લિસિસ બફર સાથે જોડાણમાં ઉપયોગ કરી શકાય છે, અને તે ઉચ્ચ સંવેદનશીલતા, મજબૂત વિશિષ્ટતા અને સારી સ્થિરતાના લક્ષણો ધરાવે છે.
આ કિટ 96-સારી રીતે સંસ્કારી કોષોના માઇક્રો-સિસ્ટમ લિસિસને ધ્યાનમાં રાખીને બનાવવામાં આવી છે, અને તેમાં સારી એકરૂપતા અને સુસંગતતા છે;કિટના ઘટકો 96 લિસિસ પ્રતિક્રિયાઓ, 96 રિવર્સ ટ્રાન્સક્રિપ્શન પ્રતિક્રિયાઓ અને 96×2 qPCR પ્રતિક્રિયાઓ પ્રદાન કરે છે, જે 96-વેલ કોષ પ્લેટને એક વખતના ઉપયોગ માટે પૂરી કરી શકે છે, રીએજન્ટના વારંવાર ખોલવા, ઠંડું અને પીગળવાથી થતા પ્રદૂષણને ટાળે છે અને રીએજન્ટની કામગીરીમાં ઘટાડો.
કીટ ઘટકો
| કીટ રચના ( 50 μએલ લિસિસ સિસ્ટમ/20 μLRT પ્રતિક્રિયા સિસ્ટમ /20μએલ qPCR પ્રતિક્રિયા સિસ્ટમ) | ડીઆરટી-03021 | ટિપ્પણી | |
| 96T | |||
| ભાગI | બફરCL | 5 એમએલ | કોષલિસિસ |
| ફોરજીનપ્રોટીઝ પ્લસ II | 100 μL | ||
| બફરST | 500 μL | ||
| ભાગ II | ડીએનએઇરેઝર | 100 μL | |
| 5× ડાયરેક્ટ RT મિક્સ | 400 μL | RT | |
| 2× ડાયરેક્ટ qPCR મિક્સ-તકમાન | 1 મીL × 2 | qPCR | |
| 50× ROX સંદર્ભ ડાય | 400µL | ||
| RNase- મફતડીડીએચ2 O | 1.7 મિલી |
| |
| Mવાર્ષિક | 1 ટુકડો | 1 સર્વિંગ | |
*: લિસિસ રીએજન્ટ ડીએનએ ઇરેઝર કીટના ભાગ II માં સમાવવામાં આવેલ છે;સેલ લિસિસ, RT અને qPCR ઘટકો અલગથી ખરીદી શકાય છે.
સુવિધાઓ અને ફાયદા
■સરળ અને અસરકારક : સેલ ડાયરેક્ટ આરટી ટેક્નોલોજી સાથે, આરએનએ સેમ્પલ માત્ર 7 મિનિટમાં મેળવી શકાય છે.
■ નમૂનાની માંગ ઓછી છે, 10 જેટલા ઓછા કોષોનું પરીક્ષણ કરી શકાય છે.
■ ઉચ્ચ થ્રુપુટ: તે ઝડપથી 384, 96, 24, 12, 6-વેલ પ્લેટમાં સંસ્કારી કોષોમાં આરએનએ શોધી શકે છે.
■ ડીએનએ ઇરેઝર રીલીઝ થયેલા જીનોમને ઝડપથી દૂર કરી શકે છે, ત્યારબાદના પ્રાયોગિક પરિણામો પરની અસરને મોટા પ્રમાણમાં ઘટાડી શકે છે.
■ ઑપ્ટિમાઇઝ્ડ RT અને qPCR સિસ્ટમ બે-પગલાં RT-PCR રિવર્સ ટ્રાંસ્ક્રિપ્શનને વધુ કાર્યક્ષમ અને PCR વધુ ચોક્કસ બનાવે છે, અને RT-qPCR પ્રતિક્રિયા અવરોધકોને વધુ પ્રતિરોધક બનાવે છે.
કીટ એપ્લિકેશન
એપ્લિકેશનનો અવકાશ: સંસ્કારી કોષો.
- સેમ્પલ લિસિસ દ્વારા બહાર પાડવામાં આવેલ RNA: આ કિટના RT-qPCR ટેમ્પલેટને જ લાગુ પડે છે.
- કીટનો ઉપયોગ નીચેના હેતુઓ માટે થઈ શકે છે: જનીન અભિવ્યક્તિ વિશ્લેષણ, siRNA- મધ્યસ્થી જનીન સાયલન્સિંગ અસરની ચકાસણી, દવાની તપાસ વગેરે.
સંગ્રહ અને શેલ્ફ જીવન
આ કિટનો ભાગ I 4 પર સંગ્રહિત થવો જોઈએ℃;ભાગ II -20℃ પર સંગ્રહિત થવો જોઈએ.
ફોરજીન પ્રોટીઝ પ્લસ II 4 પર સંગ્રહિત થવો જોઈએ℃, -20℃ પર સ્થિર થશો નહીં.
રીએજન્ટ 2×ડાયરેક્ટ qPCR મિક્સ-તાકમાન -20 પર સંગ્રહિત હોવું જોઈએ℃અંધારા માં;જો વારંવાર ઉપયોગ કરવામાં આવે, તો તે 4 પર પણ સંગ્રહિત કરી શકાય છે℃ ટૂંકા ગાળાના સ્ટોરેજ માટે (10 દિવસમાં ઉપયોગ કરો).
રીઅલ ટાઇમ પીસીઆર પ્રાઇમર ડિઝાઇન સિદ્ધાંતો
ફોરવર્ડ પ્રાઈમર અને રિવર્સ પ્રાઈમર
રીયલ ટાઈમ પીસીઆર માટે, પ્રાઈમર ડીઝાઈન ખૂબ જ મહત્વપૂર્ણ છે.પ્રાઇમર્સ પીસીઆર એમ્પ્લીફિકેશનની વિશિષ્ટતા અને કાર્યક્ષમતા સાથે સંબંધિત છે, અને નીચેના સિદ્ધાંતોના સંદર્ભમાં ડિઝાઇન કરી શકાય છે:
- પ્રાઈમર લંબાઈ: 18-30bp.
- GC સામગ્રી: 40-60%.
- Tm મૂલ્ય: પ્રાઈમર ડિઝાઇન સોફ્ટવેર, જેમ કે પ્રાઈમર 5, પ્રાઈમરનું Tm મૂલ્ય આપી શકે છે.અપસ્ટ્રીમ અને ડાઉનસ્ટ્રીમ પ્રાઈમર્સના Tm મૂલ્યો શક્ય તેટલા નજીક હોવા જોઈએ.Tm ગણતરી સૂત્રનો પણ ઉપયોગ કરી શકાય છે: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).PCR કરતી વખતે, 5 °C ના પ્રાઈમર Tm મૂલ્યથી નીચેનું તાપમાન સામાન્ય રીતે એનેલિંગ તાપમાન તરીકે પસંદ કરવામાં આવે છે (એનીલિંગ તાપમાનમાં અનુરૂપ વધારો PCR પ્રતિક્રિયાની વિશિષ્ટતામાં વધારો કરી શકે છે).
- પ્રાઇમર્સ અને પીસીઆર ઉત્પાદનો:
- ડિઝાઇન પ્રાઈમર પીસીઆર એમ્પ્લીફિકેશન ઉત્પાદન લંબાઈ પ્રાધાન્ય 100-150bp છે.
- નમૂનાના ગૌણ માળખાકીય વિસ્તારમાં ડિઝાઇન પ્રાઇમર્સ શક્ય તેટલું ટાળવું જોઈએ.
- અપસ્ટ્રીમ અને ડાઉનસ્ટ્રીમ પ્રાઈમર્સના 3′ છેડા વચ્ચે 2 અથવા વધુ પૂરક પાયા બનાવવાનું ટાળો.
- પ્રાઈમર 3′ ટર્મિનલ બેઝ 3 વધારાના સળંગ G અથવા C સાથે હાજર હોઈ શકતું નથી.
- પ્રાઈમર્સમાં પૂરક રચનાઓ હોઈ શકતી નથી, અન્યથા હેરપિન સ્ટ્રક્ચર બનાવવામાં આવશે, જે પીસીઆર એમ્પ્લીફિકેશનને અસર કરશે.
- ATCG પ્રાઈમર ક્રમમાં શક્ય તેટલું સમાનરૂપે વિતરિત કરવું જોઈએ, અને 3′ ટર્મિનલ બેઝને T તરીકે ટાળવું જોઈએ.
પરિશિષ્ટ1: સીએલ ડાયરેક્ટRT-qPCR કીટ ઘટકોટી પૂરક પેક
1.સેલ લિસિસ સોલ્યુશન
| સેલ લિસિસ સોલ્યુશન | |||
| કીટ ઘટકો (24-વેલ લિસિસ સિસ્ટમ / કૂવો) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 ટી | 500 ટી | ||
| ભાગઆઈ | બફર CL | 20 મિલી | 100 મિલી |
| ફોરજીન પ્રોટીઝ પ્લસ II | 400 μl | 1 મિલી × 2 | |
| બફર એસ.ટી | 1 મિલી × 2 | 10 મિલી | |
| ભાગII | ડીએનએ ઇરેઝર | 400 μl | 1 મિલી × 2 |
| RT મિક્સ | |
| કીટ ઘટકો (20 μl પ્રતિક્રિયા સિસ્ટમ) | DRT-01011-B1 |
| 200 ટી | |
| 5× ડાયરેક્ટ RT મિક્સ | 800 μl |
| RNase-મુક્ત ddH2O | 1.7 મિલી × 2 |
| qPCR મિક્સ | ||
| કીટ ઘટકો (20 μl પ્રતિક્રિયા સિસ્ટમ) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 ટી | 1000 ટી | |
| 2× ડાયરેક્ટ qPCR મિક્સ-તકમાન | 1 મિલી × 2 | 1.7 મિલી × 6 |
| 20× ROX સંદર્ભ ડાય | 40 μl | 200 μl |
| RNase-મુક્ત ddH2O | 1.7 મિલી | 10 મિલી |
સૂચના માર્ગદર્શિકા:
