કોઈ એમ્પ્લીફિકેશન સિગ્નલો નથી

1. કિટમાં રહેલ Taq DNA પોલિમરેઝ અયોગ્ય સંગ્રહ અથવા કીટની સમાપ્તિને કારણે તેની પ્રવૃત્તિ ગુમાવે છે.
ભલામણ: કીટની સ્ટોરેજ શરતોની પુષ્ટિ કરો;PCR સિસ્ટમમાં યોગ્ય માત્રામાં Taq DNA પોલિમરેઝ ફરીથી ઉમેરો અથવા સંબંધિત પ્રયોગો માટે નવી રિયલ ટાઈમ PCR કિટ ખરીદો.

2. DNA ટેમ્પલેટમાં Taq DNA પોલિમરેઝના ઘણા અવરોધકો છે.
સૂચન: નમૂનાને ફરીથી શુદ્ધ કરો અથવા ઉપયોગમાં લેવાતા નમૂનાની માત્રામાં ઘટાડો કરો.

3.Mg2+ એકાગ્રતા યોગ્ય નથી.
ભલામણ: અમે પ્રદાન કરીએ છીએ તે 2× વાસ્તવિક PCR મિક્સનું Mg2+ સાંદ્રતા 3.5mM છે.જો કે, કેટલાક વિશિષ્ટ પ્રાઇમર્સ અને નમૂનાઓ માટે, Mg2+ સાંદ્રતા વધારે હોઈ શકે છે.તેથી, તમે Mg2+ એકાગ્રતાને ઑપ્ટિમાઇઝ કરવા માટે સીધા MgCl2 ઉમેરી શકો છો.ઑપ્ટિમાઇઝેશન માટે દરેક વખતે Mg2+ 0.5mM વધારવાની ભલામણ કરવામાં આવે છે.

4.PCR એમ્પ્લીફિકેશન શરતો યોગ્ય નથી, અને પ્રાઈમર ક્રમ અથવા સાંદ્રતા અયોગ્ય છે.
સૂચન: પ્રાઈમર સિક્વન્સની શુદ્ધતાની પુષ્ટિ કરો અને પ્રાઈમરને ડિગ્રેડ કરવામાં આવ્યું નથી;જો એમ્પ્લીફિકેશન સિગ્નલ સારું ન હોય, તો એનિલિંગ તાપમાન ઘટાડવાનો પ્રયાસ કરો અને પ્રાઈમર સાંદ્રતાને યોગ્ય રીતે સમાયોજિત કરો.

5. ટેમ્પલેટની માત્રા ખૂબ ઓછી અથવા ખૂબ વધારે છે.
ભલામણ: ટેમ્પલેટ લાઇનરાઇઝેશન ગ્રેડિયન્ટ ડિલ્યુશન કરો અને રીઅલ ટાઇમ પીસીઆર પ્રયોગ માટે શ્રેષ્ઠ પીસીઆર અસર સાથે ટેમ્પલેટ સાંદ્રતા પસંદ કરો.

NTC નું બહુ ઊંચું ફ્લોરોસેન્સ મૂલ્ય છે

1. ઓપરેશન દરમિયાન રીએજન્ટ દૂષણ થાય છે.
ભલામણ: રીઅલ ટાઇમ પીસીઆર પ્રયોગો માટે નવા રીએજન્ટ સાથે બદલો.

2. PCR પ્રતિક્રિયા પ્રણાલીની તૈયારી દરમિયાન દૂષણ થયું.
ભલામણ: ઓપરેશન દરમિયાન જરૂરી રક્ષણાત્મક પગલાં લો, જેમ કે: લેટેક્સ ગ્લોવ્ઝ પહેરવા, ફિલ્ટર સાથે પીપેટ ટીપનો ઉપયોગ કરવો વગેરે.

3.પ્રાઈમર ડિગ્રેડેડ છે, અને પ્રાઇમર્સનું ડિગ્રેડેશન બિન-વિશિષ્ટ એમ્પ્લીફિકેશનનું કારણ બનશે.
સૂચન: પ્રાઇમર્સ ડિગ્રેજ્ડ છે કે કેમ તે શોધવા માટે SDS-PAGE ઇલેક્ટ્રોફોરેસીસનો ઉપયોગ કરો અને રીઅલ ટાઇમ પીસીઆર પ્રયોગો માટે નવા પ્રાઇમર્સ સાથે બદલો.

પ્રાઈમર ડિમર અથવા બિન-વિશિષ્ટ એમ્પ્લીફિકેશન

1.Mg2+ એકાગ્રતા યોગ્ય નથી.
ભલામણ: અમે પ્રદાન કરીએ છીએ તે 2× વાસ્તવિક PCR EasyTM મિક્સનું Mg2+ સાંદ્રતા 3.5 mM છે.જો કે, કેટલાક વિશિષ્ટ પ્રાઇમર્સ અને નમૂનાઓ માટે, Mg2+ સાંદ્રતા વધારે હોઈ શકે છે.તેથી, તમે Mg2+ એકાગ્રતાને ઑપ્ટિમાઇઝ કરવા માટે સીધા MgCl2 ઉમેરી શકો છો.ઑપ્ટિમાઇઝેશન માટે દરેક વખતે Mg2+ 0.5mM વધારવાની ભલામણ કરવામાં આવે છે.

2.પીસીઆર એન્નીલિંગ તાપમાન ખૂબ ઓછું છે.
સૂચન: પીસીઆર એન્નીલિંગ તાપમાનમાં દર વખતે 1℃ અથવા 2℃ વધારો કરો.

3.PCR ઉત્પાદન ખૂબ લાંબુ છે.
ભલામણ: રીયલ ટાઈમ પીસીઆર પ્રોડક્ટની લંબાઈ 100-150bp વચ્ચે હોવી જોઈએ, 500bp કરતાં વધુ નહીં.

4.પ્રાઈમર ડિગ્રેડ થાય છે, અને પ્રાઇમર્સનું ડિગ્રેડેશન ચોક્કસ એમ્પ્લીફિકેશનના દેખાવ તરફ દોરી જશે.
સૂચન: પ્રાઇમર્સ ડિગ્રેજ્ડ છે કે કેમ તે શોધવા માટે SDS-PAGE ઇલેક્ટ્રોફોરેસીસનો ઉપયોગ કરો અને રીઅલ ટાઇમ પીસીઆર પ્રયોગો માટે નવા પ્રાઇમર્સ સાથે બદલો.

5.PCR સિસ્ટમ અયોગ્ય છે, અથવા સિસ્ટમ ખૂબ નાની છે.
સૂચન: PCR પ્રતિક્રિયા પ્રણાલી ખૂબ નાની છે તે શોધની ચોકસાઈમાં ઘટાડો કરશે.રીયલ ટાઈમ પીસીઆર પ્રયોગને ફરીથી ચલાવવા માટે માત્રાત્મક પીસીઆર સાધન દ્વારા ભલામણ કરેલ પ્રતિક્રિયા પ્રણાલીનો ઉપયોગ કરવો શ્રેષ્ઠ છે.

માત્રાત્મક મૂલ્યોની નબળી પુનરાવર્તિતતા

1. સાધન ખરાબ થઈ રહ્યું છે.
સૂચન: ઇન્સ્ટ્રુમેન્ટના દરેક પીસીઆર હોલ વચ્ચે ભૂલો હોઈ શકે છે, જેના પરિણામે તાપમાન વ્યવસ્થાપન અથવા તપાસ દરમિયાન નબળી પુનઃઉત્પાદનક્ષમતા જોવા મળે છે.કૃપા કરીને અનુરૂપ સાધનની સૂચનાઓ અનુસાર તપાસો.

2. નમૂનાની શુદ્ધતા સારી નથી.
ભલામણ: અશુદ્ધ નમૂનાઓ પ્રયોગની નબળી પુનઃઉત્પાદનક્ષમતા તરફ દોરી જશે, જેમાં નમૂના અને પ્રાઇમર્સની શુદ્ધતાનો સમાવેશ થાય છે.નમૂનાને ફરીથી શુદ્ધ કરવું શ્રેષ્ઠ છે, અને પ્રાઇમર્સ SDS-PAGE દ્વારા શ્રેષ્ઠ રીતે શુદ્ધ થાય છે.

3.PCR સિસ્ટમની તૈયારી અને સંગ્રહનો સમય ઘણો લાંબો છે.
સૂચન: તૈયારી કર્યા પછી તરત જ પીસીઆર પ્રયોગ માટે રીયલ ટાઈમ પીસીઆર સિસ્ટમનો ઉપયોગ કરો, અને તેને વધુ સમય માટે બાજુ પર ન રાખો.

4.PCR એમ્પ્લીફિકેશન શરતો યોગ્ય નથી, અને પ્રાઈમર ક્રમ અથવા સાંદ્રતા અયોગ્ય છે.
સૂચન: પ્રાઈમર સિક્વન્સની શુદ્ધતાની પુષ્ટિ કરો અને પ્રાઈમરને ડિગ્રેડ કરવામાં આવ્યું નથી;જો એમ્પ્લીફિકેશન સિગ્નલ સારું ન હોય, તો એનિલિંગ તાપમાન ઘટાડવાનો પ્રયાસ કરો અને પ્રાઈમર સાંદ્રતાને યોગ્ય રીતે સમાયોજિત કરો.

5.PCR સિસ્ટમ અયોગ્ય છે, અથવા સિસ્ટમ ખૂબ નાની છે.
સૂચન: PCR પ્રતિક્રિયા પ્રણાલી ખૂબ નાની છે તે શોધની ચોકસાઈમાં ઘટાડો કરશે.રીયલ ટાઈમ પીસીઆર પ્રયોગને ફરીથી ચલાવવા માટે માત્રાત્મક પીસીઆર સાધન દ્વારા ભલામણ કરેલ પ્રતિક્રિયા પ્રણાલીનો ઉપયોગ કરવો શ્રેષ્ઠ છે.