A260/A230 નો નીચો ગુણોત્તર સામાન્ય રીતે 230nm પર મહત્તમ શોષણ તરંગલંબાઇ સાથેની અશુદ્ધિઓને કારણે થાય છે.ચાલો જોઈએ કે આ અશુદ્ધિઓમાં શું શામેલ છે:

• સામાન્ય પ્રદૂષકો	શોષણ તરંગલંબાઇ	ગુણોત્તર અસર
  પ્રોટીન	~230nm અને 280nm	A નો એક સાથે ઘટાડો260/A 280અને એ260/A 280ગુણોત્તર
  ગુઆનીડીન મીઠું	220-240 એનએમ	એ ઘટાડો260/A 280ગુણોત્તર
  ફિનોલ	~270nm	-
  ટ્રાઈઝોલ	~230nm અને 270nm	એ ઘટાડો260/A 280ગુણોત્તર
  EDTA	~230nm	એ ઘટાડો260/A 280ગુણોત્તર
  ઇથેનોલ	230-240 એનએમ	એ ઘટાડો260/A 280ગુણોત્તર

 
 
 
શોષણ તરંગલંબાઇ અને સામાન્ય પ્રદૂષકોની વિપરીત કિંમત

Pરોટીન દૂષણ
પ્રોટીન પ્રદૂષણને ન્યુક્લીક એસિડ નિષ્કર્ષણ પ્રક્રિયામાં સૌથી સામાન્ય પ્રદૂષણ તરીકે ગણી શકાય.પ્રોટીન ઉપલા જલીય તબક્કા અને નીચલા વચ્ચે અસ્તિત્વ ધરાવે છેકાર્બનિકતબક્કોપ્રદૂષણ A260/A280 અને A260/A230 ના ગુણોત્તરને એક જ સમયે ઘટાડશે, અને A260/A230 નો ગુણોત્તર A260/A280 ના ગુણોત્તર કરતાં વધુ સ્પષ્ટપણે બદલાશે.
અનુગામી દરમિયાનરિવર્સ ટ્રાન્સક્રિપ્શનor qPCR પ્રતિક્રિયાઓ, પ્રોટીન અવશેષો એન્ઝાઇમના કાર્યમાં અવરોધ અથવા દખલ કરી શકે છે.પ્રોટીનના દૂષણને ટાળવાનો શ્રેષ્ઠ માર્ગ એ છે કે સુપરનેટન્ટની મહત્વાકાંક્ષા કરતી વખતે "વધુ કરતાં ઓછી, ઘણી વખત નાની રકમ" ના સિદ્ધાંતને ધ્યાનમાં રાખવું.

2. ગુઆનીડીનિયમ પ્રદૂષણ
હાઇડ્રોક્લોરાઇડ (GuHCl) અને guanidine thiocyanate (GTC) પ્રોટીનને વિક્ષેપિત કરવાની અસર ધરાવે છે, જે ન્યુક્લીક એસિડ નિષ્કર્ષણ પ્રક્રિયા દરમિયાન કોષ પટલને ઝડપથી નાશ કરી શકે છે, જેના કારણે પ્રોટીન વિકૃતિકરણ અને અવક્ષેપ થાય છે.GuHCl અને GTC ની શોષણ તરંગલંબાઇ 220-240 nm ની વચ્ચે છે, અનેશેષ ગુઆનિડીનિયમ મીઠું A260/A230 ના ગુણોત્તરને ઘટાડશે.તેમ છતાં શેષ ગુઆનિડીનિયમ મીઠું ગુણોત્તર ઘટાડશે,ડાઉનસ્ટ્રીમ પ્રયોગો પર અસર ખરેખર નહિવત છે.

3. ટ્રાઇઝોલ દૂષણ
ટ્રાઇઝોલનું મુખ્ય ઘટક ફિનોલ છે.ફિનોલનું મુખ્ય કાર્ય કોષોને લીઝ કરવાનું અને કોષોમાં પ્રોટીન અને ન્યુક્લીક એસિડ પદાર્થો છોડવાનું છે.જોકે ફિનોલ અસરકારક રીતે પ્રોટીનને ડિનેચર કરી શકે છે, તે RNase પ્રવૃત્તિને સંપૂર્ણપણે અટકાવી શકતું નથી.તેથી, અંતર્જાત અને બાહ્ય આરનેઝને અટકાવવા માટે TRIzol માં 8-hydroxyquinoline, guanidine isothiocyanate, β-mercaptoethanol, વગેરે ઉમેરવામાં આવે છે.
સેલ્યુલર આરએનએ બહાર કાઢતી વખતે, ટ્રાઇઝોલ ઝડપથી કોશિકાઓને લીસ કરી શકે છે અને કોષોમાંથી મુક્ત થતા ન્યુક્લિઝને અટકાવી શકે છે, અને અવશેષ ટ્રાઇઝોલ A260/A230 ના ગુણોત્તરમાં નોંધપાત્ર ઘટાડો કરશે.
પ્રક્રિયા પદ્ધતિ: સેન્ટ્રીફ્યુજીંગ કરતી વખતે, એ નોંધવું જોઈએ કે ટ્રાઈઝોલમાં ફિનોલ 4° અને ઓરડાના તાપમાનની સ્થિતિમાં પાણીના તબક્કામાં સરળતાથી દ્રાવ્ય છે.

4. ઇથેનોલ અવશેષો
ઇથેનોલનો ઉપયોગ અંતિમ પ્રક્રિયામાં ડીએનએને અવક્ષેપિત કરવા માટે થાય છે જ્યારે ડીએનએ સાથે બંધાયેલા મીઠા આયનોને ઓગાળી શકાય છે.સૌથી વધુ શોષણ તરંગલંબાઇશોષણની ટોચઇથેનોલ પણ 230-240 એનએમ પર છે, જેA260/A230 નો ગુણોત્તર પણ ઘટાડશે.
ઇથેનોલ અવશેષોને ટાળવાની પદ્ધતિને અંતિમ ઉત્સર્જન દરમિયાન બે વાર પુનરાવર્તિત કરી શકાય છે.ફ્યુમ હૂડઇલ્યુશન માટે બફર ઉમેરતા પહેલા ઇથેનોલને સંપૂર્ણપણે બાષ્પીભવન થવા દેવા માટે બે મિનિટ માટે.
જો કે, એ જાણવું જોઈએ કે ગુણોત્તર માત્ર RNA ગુણવત્તાનું મૂલ્યાંકન સૂચક છે.જો ઉપરોક્ત કામગીરીનું કડક રીતે નિયમન કરવામાં આવે તો, ગુણોત્તર અને પ્રમાણભૂત શ્રેણી વચ્ચેના વિચલનની ડાઉનસ્ટ્રીમ પ્રયોગો પર મોટી અસર થશે નહીં.
સંબંધિત વસ્તુઓ:
એનિમલ ટોટલ આરએનએ આઇસોલેશન કીટ
પ્લાન્ટ ટોટલ આરએનએ આઇસોલેશન કીટ
સેલ ટોટલ આરએનએ આઇસોલેશન કીટ
પ્લાન્ટ ટોટલ આરએનએ આઇસોલેશન કીટ પ્લસ