કૉલમ પ્લગ થઈ

કૉલમ પ્લગ થયા પછી, આરએનએ ઉપજમાં ઘટાડો થાય છે અથવા આરએનએને શુદ્ધ કરવું અશક્ય પણ છે, અને મેળવેલ આરએનએ સમૂહ ઓછો છે.

સામાન્ય કારણ વિશ્લેષણ:

1. નમૂના વિરામ સંપૂર્ણ નથી.

નમૂના તૂટવાથી ડીએનએ-ક્લીનિંગ કોલમને સંપૂર્ણપણે અવરોધિત કરવામાં આવતું નથી, જ્યારે આરએનએ ઉપજ અને ગુણવત્તાને અસર કરે છે.જ્યારે તમે નમૂનાઓ તોડી નાખો ત્યારે અમે પૂરતા પ્રવાહી નાઇટ્રોજનમાં ઝડપી ગ્રાઇન્ડીંગ ઓપરેશનની ભલામણ કરીએ છીએ, નમૂનાની કોષ દિવાલ, કોષ પટલ અને અન્ય પેશીઓને કચડી નાખવાનો પ્રયાસ કરો.પોલિઓલ પોલિસેકરાઇડ્સના છોડના નમૂનાઓ માટે, અમે ભલામણ કરીએ છીએ કે તમે પ્લાન્ટ ટોટલ આરએનએ આઇસોલેશન કિટ પ્લસનો ઉપયોગ કરો.

2. જ્યારે ડીએનએ-ક્લીનિંગ કોલમ સાથે અલગ કરાયેલા સેમ્પલ સુપરનેટન્ટને ચૂસવામાં આવે છે, ત્યારે સંભવિત કોષ ખંડિત અવક્ષેપ શ્વાસમાં લઈ શકાય છે.

લેવામાં આવેલ સેલ ફ્રેગમેન્ટેડ સેડિમેન્ટ્સ RNA-ONLY કૉલમનું કારણ બનશે જે RNA શોષણ ઑપરેશન કરવામાં આવે ત્યારે બ્લૉક થઈ જશે (પગલું 6 જુઓ).સેલ કચરાને ચૂસવામાં ન આવે તે માટે આ સુપરનેટન્ટને ચૂસતી વખતે અમે તમને કાળજીપૂર્વક ભલામણ કરીએ છીએ.

3. નમૂનાની પ્રારંભિક રકમ ખૂબ વધારે છે.

વધુ પડતા નમૂનાના ઉપયોગથી બફર PSL1 દ્વારા અપૂર્ણ સેમ્પલ ફ્રેગમેન્ટેશન અથવા અપૂર્ણ સેલ લિસિસમાં પરિણમશે, જેના પરિણામે શુદ્ધિકરણ દરમિયાન શુદ્ધિકરણ કૉલમ અવરોધિત થશે.પ્લાન્ટ ટોટલ આરએનએ આઇસોલેશન કિટ દરેક એક શુદ્ધ ઓપરેટિંગ સેમ્પલ 50 મિલિગ્રામ છે.પોલિઓલ પોલિસેકરાઇડ્સના છોડના નમૂનાઓ માટે, અમે ભલામણ કરીએ છીએ કે તમે પ્લાન્ટ ટોટલ આરએનએ આઇસોલેશન કિટ પ્લસનો પ્રયાસ કરો.

4. સેન્ટ્રીફ્યુજનું તાપમાન ખૂબ ઓછું છે.

સમગ્ર આરએનએ અલગતા અને શુદ્ધિકરણ પ્રક્રિયા ઓરડાના તાપમાને હાથ ધરવામાં આવે છે (20-25°સી), સિવાય કે નમૂના પેશી પ્રવાહી નાઇટ્રોજન દ્વારા તૂટી જાય છે. કેટલાક ક્રાયોજેનિક સેન્ટ્રીફ્યુજનું તાપમાન 20 કરતા ઓછું હોય છે.℃, જે DNA-સફાઈ કૉલમ અને/અથવા RNA-ઓન્લી કૉલમના અવરોધનું કારણ બની શકે છે.જો આવું થાય, તો સેન્ટ્રીફ્યુજ તાપમાન 20-25 પર સેટ કરો℃, અનેખાતરી કરો કે લિસિસ મિશ્રણ અને/અથવા ઇથેનોલ-ઉમેરાયેલ સુપરનેટન્ટ 37 પર પહેલાથી ગરમ કરવામાં આવ્યું હતું°C.

કોઈ આરએનએ કાઢવામાં આવ્યું નથી અથવા આરએનએ ઉપજ ઓછી નથી

સામાન્ય રીતે પુનઃપ્રાપ્તિ કાર્યક્ષમતાને અસર કરતા ઘણા પરિબળો હોય છે, જેમ કે: સેમ્પલ આરએનએ સામગ્રી, ઓપરેશન પદ્ધતિ, ઇલ્યુશન વોલ્યુમ વગેરે.

નીચે પ્રમાણે સામાન્ય કારણોનું વિશ્લેષણ:

1. ઓપરેશન દરમિયાન બરફ સ્નાન અથવા નીચા તાપમાન (4°C) સેન્ટ્રીફ્યુગેશન કરવામાં આવ્યું હતું.

સૂચન: ઓરડાના તાપમાને કામ કરો (15-25°C) સમગ્ર પ્રક્રિયામાં, બરફ સ્નાન અને નીચા તાપમાને સેન્ટ્રીફ્યુગેશન ન કરો.

2. નમૂનાની અયોગ્ય જાળવણી અથવા નમૂનાની લાંબા ગાળાની જાળવણીને કારણે આરએનએ અધોગતિ પામ્યું છે.

ભલામણ: તાજા એકત્રિત નમૂનાઓ પ્રવાહી નાઇટ્રોજનમાં ઝડપથી સ્થિર થવું જોઈએ, અને પછી લાંબા સમય સુધી -80 ° સે પર સંગ્રહિત થવું જોઈએ, નમૂનાઓને વારંવાર ઠંડું અને પીગળવાનું ટાળો;અથવા તરત જ નમૂનાઓને RNA સ્ટેબિલાઇઝર RNAlater સોલ્યુશન (પ્રાણી નમૂનાઓ) માં પલાળી દો.

3. અપર્યાપ્ત નમૂનાનું વિભાજન અને લિસિસ શુદ્ધિકરણ સ્તંભના અવરોધ તરફ દોરી જાય છે.

સૂચન: પેશીને ગ્રાઇન્ડ કરતી વખતે, કૃપા કરીને ખાતરી કરો કે પેશી પૂરતા પ્રમાણમાં ગ્રાઉન્ડ છે, અને તેને ઝડપથી પૂર્વ-તૈયાર બફર PSL1 પર સ્થાનાંતરિત કરો (પુષ્ટિ કરો કે β-ME નું સાચું પ્રમાણ ઉમેરવામાં આવ્યું છે, પ્રક્રિયાનું પગલું 1 જુઓ).

4. eluent ખોટી રીતે ઉમેરવામાં આવ્યું હતું.

સૂચન: ખાતરી કરો કે RNase-ફ્રી ddH2O શુદ્ધિકરણ કૉલમ મેમ્બ્રેનની મધ્યમાં ટપક્યું છે.

5. બફર PSL2 અથવા બફર PRW2 માં સંપૂર્ણ ઇથેનોલની સાચી માત્રા ઉમેરવામાં આવી ન હતી.

સૂચન: કૃપા કરીને સૂચનાઓનું પાલન કરો, Buffer PSL2 અને Buffer PRW2 માં સંપૂર્ણ ઇથેનોલની સાચી માત્રા ઉમેરો અને કીટનો ઉપયોગ થાય તે પહેલાં સારી રીતે ભળી દો.

6.પેશીના નમૂનાની માત્રા અયોગ્ય છે.

સૂચન: બફર PSL1 ના 500 μl દીઠ 50 મિલિગ્રામ પેશીનો ઉપયોગ કરો.વધુ પડતા પેશીનો ઉપયોગ કરવાથી કાઢવામાં આવેલ આરએનએનું પ્રમાણ ઘટશે અને પરિણામી આરએનએની શુદ્ધતા પણ ઘટી જશે.અમે ભારપૂર્વક ભલામણ કરીએ છીએ કે પ્રારંભિક નમૂનાની માત્રા RNA નિષ્કર્ષણ કામગીરી દીઠ 50 મિલિગ્રામથી વધુ ન હોવી જોઈએ.

7.અયોગ્ય ઇલ્યુશન વોલ્યુમ અથવા અપૂર્ણ ઇલ્યુશન.

સૂચન: શુદ્ધિકરણ સ્તંભનું એલ્યુએન્ટ વોલ્યુમ 50-200 μl છે;જો ઉત્સર્જન અસર સંતોષકારક ન હોય, તો પ્રીહિટેડ RNase-ફ્રી ddH2O, જેમ કે 5-10 મિનિટ ઉમેર્યા પછી ઓરડાના તાપમાને સમય વધારવાની ભલામણ કરવામાં આવે છે.

8. BufferPRW2 સાથે ધોવા પછી શુદ્ધિકરણ કૉલમમાં ઇથેનોલ અવશેષો હોય છે.

સૂચન: જો ખાલી ટ્યુબને 1 મિનિટ માટે સેન્ટ્રીફ્યુગ કરવામાં આવે અને બફર PRW2 માં ધોવા પછી પણ ઇથેનોલ બાકી રહે, તો તમે ખાલી ટ્યુબના સેન્ટ્રીફ્યુગેશનનો સમય વધારીને 2 મિનિટ કરી શકો છો, અથવા બાકી રહેલા ઇથેનોલને સંપૂર્ણપણે દૂર કરવા માટે શુદ્ધિકરણ કૉલમને ઓરડાના તાપમાને 5 મિનિટ માટે મૂકી શકો છો.

9. કીટનો ઉપયોગ ખોટી રીતે થયો હતો.

સૂચન: પોલિફેનોલિક પોલિસેકરાઇડ્સના છોડના નમૂનાઓ માટે, પ્લાન્ટ ટોટલ આરએનએ આઇસોલેશન કીટ જેવી સામાન્ય કીટનો ઉપયોગ કરીને આદર્શ આરએનએ નમૂનાઓ મેળવી શકાશે નહીં.અમે તમને પ્લાન્ટ ટોટલ આરએનએ આઇસોલેશનકિટ પ્લસનો ઉપયોગ કરવાની ભલામણ કરીએ છીએ, જે ખાસ કરીને પોલિફેનોલિક પોલિસેકરાઇડ પ્લાન્ટના નમૂનાઓ માટે રચાયેલ છે.પોલિફેનોલ અને પોલિસેકરાઇડ છોડના નમૂનાઓમાંથી આરએનએ કાઢવા માટે ખાસ વિકસિત કિટ.

OD260/OD280 મૂલ્ય ઓછું છે

ddH2O સાથે આરએનએ ઇલ્યુશન અને સ્પેક્ટ્રોફોટોમીટર રીડિંગ માટે ઉપયોગમાં લેવાતા OD260/OD280 મૂલ્યો ઓછાં થાય છે.અમે પ્રમાણમાં સાચા OD260/OD280 મૂલ્યો મેળવવા માટે 10 mM Tris-HCl, pH 7.5 (RNase-ફ્રી ddH2O ને બદલે) નો ઉપયોગ કરવાની ભલામણ કરીએ છીએ, પૃષ્ઠ 19 પર "RNA એકાગ્રતા અને શુદ્ધિકરણ એસેઝ" જુઓ.

શુદ્ધ થયેલ આરએનએ અધોગતિ પામે છે

શુદ્ધ RNA ની ગુણવત્તા નમૂનાની જાળવણી, RNase દૂષણ અને મેનીપ્યુલેશન જેવા પરિબળો સાથે સંબંધિત છે.

સામાન્ય કારણોનું વિશ્લેષણ:

1.પેશીના નમૂના સંગ્રહ કર્યા પછી સમયસર સંગ્રહિત કરવામાં આવ્યા ન હતા.

ભલામણ: જો પેશીના નમૂનાઓ સંગ્રહ કર્યા પછી સમયસર ઉપયોગમાં લેવાતા ન હોય, તો કૃપા કરીને તેને નીચા તાપમાને તરત જ પ્રવાહી નાઇટ્રોજનમાં સંગ્રહિત કરો અથવા પ્રવાહી નાઇટ્રોજનમાં ઝડપી ઠંડું થયા પછી લાંબા ગાળાના સંગ્રહ માટે તેમને -80 ° સે પર સ્થાનાંતરિત કરો, અથવા તરત જ નમૂનાઓને RNA સ્ટેબિલાઇઝર RNAlater સોલ્યુશન (પ્રાણી નમૂનાઓ) માં નિમજ્જન કરો.RNA નિષ્કર્ષણ માટે, તાજા એકત્રિત પેશી નમૂનાઓનો ઉપયોગ કરવાનો પ્રયાસ કરો.

2. પેશીના નમૂનાઓનું વારંવાર ઠંડું અને પીગળવું.

સૂચન: પેશીના નમૂનાઓનો સંગ્રહ કરતી વખતે, સાચવવા માટે તેમને નાના ટુકડાઓમાં કાપવા અને નમૂનાઓના વારંવાર થીજવા અને પીગળવાથી થતા આરએનએના અધોગતિને ટાળવા માટે તેનો ઉપયોગ કરતી વખતે તેમાંથી એક ભાગ કાઢવો શ્રેષ્ઠ છે.

3.RNase ઓપરેશન રૂમમાં રજૂ કરવામાં આવે છે અથવા ડિસ્પોઝેબલ ગ્લોવ્સ, માસ્ક વગેરે પહેર્યા નથી.

સૂચન: RNA નિષ્કર્ષણના પ્રયોગો અલગ-અલગ RNA ઑપરેશન્સમાં શ્રેષ્ઠ રીતે કરવામાં આવે છે, અને પ્રયોગ પહેલાં પ્રયોગશાળાના ટેબલને સાફ કરવું જોઈએ, અને RNase ના પ્રવેશને કારણે RNA અધોગતિને ટાળવા માટે પ્રયોગ દરમિયાન નિકાલજોગ ગ્લોવ્સ અને માસ્ક પહેરવા જોઈએ.

4. રીએજન્ટ ઉપયોગ દરમિયાન RNase દ્વારા દૂષિત થાય છે.

સૂચન: સંબંધિત પ્રયોગો માટે છોડની કુલ RNA નિષ્કર્ષણ કિટ્સની નવી શ્રેણી સાથે બદલો.

5. આરએનએ મેનીપ્યુલેશન માટે વપરાતી સેન્ટ્રીફ્યુજ ટ્યુબ અને પીપેટ ટીપ્સ RNase થી દૂષિત છે.

સૂચન: ખાતરી કરો કે આરએનએ નિષ્કર્ષણમાં વપરાતી સેન્ટ્રીફ્યુજ ટ્યુબ, પીપેટ ટીપ્સ, પાઈપેટ્સ વગેરે તમામ RNase-મુક્ત છે.

સૂચના માર્ગદર્શિકા:

પ્લાન્ટ ટોટલ આરએનએ આઇસોલેશન કિટ પ્લસ સૂચના માર્ગદર્શિકા