સમસ્યા વિશ્લેષણ માર્ગદર્શિકા

The following is an analysis of the problems that may be encountered in the extraction of plant genomic DNA, hoping to be helpful to your experiments. In addition, for other experimental or technical problems other than operation instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us: 028-83360257 or E-mali: Tech@foregene.com.

ઓછી ઉપજ અથવા ડીએનએ નથી

સામાન્ય રીતે ઘણા પરિબળો છે જે જીનોમિક ડીએનએની ઉપજને અસર કરે છે, જેમાં નમૂનાનો સ્ત્રોત, નમૂનાની ઉંમર, નમૂનાના સંગ્રહની સ્થિતિ અને ઓપરેશનનો સમાવેશ થાય છે.

નિષ્કર્ષણ દરમિયાન જીનોમિક ડીએનએ મેળવી શકાયું નથી

1. પેશીના નમૂનાઓ અયોગ્ય રીતે સંગ્રહિત અથવા ખૂબ લાંબા સમય સુધી સંગ્રહિત થાય છે, જેના પરિણામે જીનોમિક ડીએનએનું અધોગતિ થાય છે.

ભલામણ: પ્રવાહી નાઇટ્રોજન અથવા -20 માં પેશીના નમૂનાઓનો સંગ્રહ કરો°સી;જીનોમિક ડીએનએ નિષ્કર્ષણ માટે નવા એકત્રિત નમૂનાઓનો ઉપયોગ કરવાનો પ્રયાસ કરો.

2. નમૂનાની ખૂબ ઓછી રકમને કારણે સંબંધિત જીનોમિક ડીએનએ કાઢવામાં ન આવે.

સૂચન: પેશીના નમૂનાઓ કે જે લાંબા સમયથી સંગ્રહિત છે અથવા ગંભીર જીનોમિક ડીએનએ અધોગતિ ધરાવે છે, નોંધપાત્ર જીનોમિક ડીએનએ કાઢવા માટે પેશીના નમૂનાઓની માત્રાને યોગ્ય રીતે વધારી શકાય છે.નમૂનાની માત્રા DNA જરૂરિયાતો અનુસાર નક્કી કરી શકાય છે, પરંતુ તાજા નમૂના 100mg કરતાં વધુ ન હોવા જોઈએ, અને શુષ્ક નમૂના 30mg કરતાં વધુ ન હોવા જોઈએ.

3. નમૂના પ્રવાહી નાઇટ્રોજન સાથે જમીનમાં નથી અથવા પ્રવાહી નાઇટ્રોજન પછી ખૂબ લાંબા સમય સુધી મૂકવામાં આવતો નથી.

સૂચન: ડીએનએ નિષ્કર્ષણ દરમિયાન, સેલ દિવાલ તોડવા માટે નમૂનાને પ્રવાહી નાઇટ્રોજન સાથે સંપૂર્ણપણે ગ્રાઉન્ડ કરવાની જરૂર છે;ગ્રાઇન્ડીંગ કર્યા પછી, કૃપા કરીને નમૂના પાવડરને 65 પર પ્રીહિટેડ PL1 માં સ્થાનાંતરિત કરો°સી શક્ય તેટલી વહેલી તકે (એકવાર જમીનનો પાવડર ઓગળી જાય, જીનોમિક ડીએનએ ઝડપથી ડિગ્રેડ થવાનું શરૂ કરશે).

4. ફોરજીન પ્રોટીઝના અયોગ્ય સંગ્રહના પરિણામે પ્રવૃત્તિ ઘટી જાય છે અથવા નિષ્ક્રિય થઈ જાય છે.

ભલામણ: ફોરજીન પ્રોટીઝની સ્ટોરેજ શરતોની પુષ્ટિ કરો અથવા એન્ઝાઈમેટિક હાઈડ્રોલિસિસ માટે તેને નવા ફોરજીન પ્રોટીઝ સાથે બદલો.

5. કિટ અયોગ્ય રીતે સંગ્રહિત અથવા ખૂબ લાંબા સમય સુધી સંગ્રહિત છે, જેના કારણે કિટમાંના કેટલાક ઘટકો નિષ્ફળ જાય છે.

ભલામણ: સંબંધિત કામગીરી માટે નવી પ્લાન્ટ જીનોમિક ડીએનએ એક્સ્ટ્રક્શન કીટ ખરીદો.

6. કીટનો અયોગ્ય ઉપયોગ.

સૂચન: પ્લાન્ટ જીનોમિક ડીએનએના નિષ્કર્ષણ અને શુદ્ધિકરણ માટે નમૂનાઓને સમર્પિત પ્લાન્ટ ડીએનએ આઇસોલેશન કીટ ખરીદો.

7. A ઉમેર્યા વિના WB બફર કરોપાણીયુક્ત ઇથેનોલ

ભલામણ: બફર ડબલ્યુબીમાં સંપૂર્ણ ઇથેનોલની સાચી માત્રા ઉમેરવાની ખાતરી કરો.

8. એલ્યુએન્ટ સિલિકા પટલ પર યોગ્ય રીતે ટપક્યું ન હતું.

સૂચન: 65 પર પ્રી-હીટેડ એલ્યુએન્ટ ઉમેરો℃સિલિકા જેલ મેમ્બ્રેનની મધ્યમાં ડ્રોપવાઇઝ કરો, અને ઇલ્યુશન કાર્યક્ષમતા વધારવા માટે તેને ઓરડાના તાપમાને 5 મિનિટ માટે છોડી દો.

ઓછી ઉપજ ધરાવનાર જીનોમિક ડીએનએ મેળવવા માટે નિષ્કર્ષણ

1. નમૂનાને અયોગ્ય રીતે સંગ્રહિત અથવા ખૂબ લાંબા સમય સુધી સંગ્રહિત કરવામાં આવે છે, જેના પરિણામે જીનોમિક ડીએનએનું અધોગતિ થાય છે.

ભલામણ: -20 પર પેશીના નમૂનાઓ સ્ટોર કરો℃;જીનોમિક ડીએનએ નિષ્કર્ષણ માટે નવા એકત્રિત પેશી નમૂનાઓનો ઉપયોગ કરવાનો પ્રયાસ કરો.

2. જો પેશીના નમૂનાઓની માત્રા ખૂબ ઓછી હોય, તો કાઢવામાં આવેલ જીનોમિક ડીએનએ ઓછું હશે.

સૂચન: કેટલાક છોડના નમૂનાઓ પાણીથી સમૃદ્ધ છે, જેમ કે જળચર છોડ જેમ કે શેવાળ વગેરે, ડોઝને યોગ્ય રીતે વધારી શકાય છે અથવા ઓપરેશનના થોડા સમય પહેલા પાણીને નિર્જલીકૃત કરી શકાય છે.

3. નમૂનાઓ પ્રવાહી નાઇટ્રોજન સાથે સંપૂર્ણપણે ગ્રાઉન્ડ ન હતા અથવા ગ્રાઇન્ડીંગ પછી ખૂબ લાંબા સમય સુધી ઓરડાના તાપમાને છોડી દેવામાં આવ્યા હતા.

સૂચન: પ્રવાહી નાઇટ્રોજન ગ્રાઇન્ડીંગ પર્યાપ્ત હોવું જોઈએ, અને નમૂનાના કોષની દિવાલ શક્ય તેટલી તૂટેલી હોવી જોઈએ;ગ્રાઇન્ડીંગ પછી તરત જ, નમૂના પાવડરને 65 માં સ્થાનાંતરિત કરવું જોઈએ℃આગલા પગલા માટે પ્રીહિટેડ બફર PL1.

4. સાચી કીટનો ઉપયોગ ન કરવો.

ભલામણ: છોડના જીનોમિક ડીએનએને કાઢવા અને શુદ્ધ કરવા માટે સમર્પિત પ્લાન્ટ ડીએનએ આઇસોલેશન કીટનો ઉપયોગ કરો.

5. ફોરજીન પ્રોટીઝના અયોગ્ય સંગ્રહના પરિણામે પ્રવૃત્તિમાં ઘટાડો અથવા નિષ્ક્રિય થઈ જાય છે.

ભલામણ: ફોરજીન પ્રોટીઝની સ્ટોરેજ શરતોની પુષ્ટિ કરો અથવા એન્ઝાઈમેટિક હાઈડ્રોલિસિસ માટે તેને નવા ફોરજીન પ્રોટીઝ સાથે બદલો.

6. Eluent સમસ્યા

ભલામણ: કૃપા કરીને ઉત્સર્જન માટે બફર EB નો ઉપયોગ કરો;જો ddH નો ઉપયોગ કરી રહ્યા હોય₂O અથવા અન્ય એલ્યુઅન્ટ્સ, ખાતરી કરો કે ઈલ્યુઅન્ટનું pH 7.0-8.5 ની વચ્ચે છે.

7. એલ્યુએન્ટ યોગ્ય રીતે ટપકતું નથી

સૂચન: કૃપા કરીને સિલિકા મેમ્બ્રેનની મધ્યમાં ઇલ્યુશન ડ્રોપ ઉમેરો અને ઇલ્યુશન કાર્યક્ષમતા વધારવા માટે તેને ઓરડાના તાપમાને 5 મિનિટ માટે છોડી દો.

8. એલ્યુએન્ટ વોલ્યુમ ખૂબ નાનું છે

સૂચન: કૃપા કરીને જિનોમિક ડીએનએ ઉત્સર્જન માટે સૂચનો અનુસાર ઇલ્યુએન્ટનો ઉપયોગ કરો, ઓછામાં ઓછા 100 કરતા ઓછા નહીંμl.

ઓછી શુદ્ધતા સાથે જીનોમિક ડીએનએ કાઢ્યું

જીનોમિક ડીએનએની ઓછી શુદ્ધતા ડાઉનસ્ટ્રીમ પ્રયોગોની નિષ્ફળતા અથવા નબળી અસર તરફ દોરી જશે, જેમ કે: એન્ઝાઇમ કાપી શકાતું નથી, અને લક્ષ્ય જનીન ટુકડો PCR દ્વારા મેળવી શકાતો નથી.

1. પરચુરણ પ્રોટીન દૂષણ, આરએનએ દૂષણ.

વિશ્લેષણ: કૉલમ ધોવા માટે બફર PW નો ઉપયોગ કરવામાં આવ્યો ન હતો;યોગ્ય સેન્ટ્રીફ્યુગેશન ઝડપે કૉલમ ધોવા માટે બફર PW નો ઉપયોગ કરવામાં આવ્યો ન હતો.

સૂચન: સુનિશ્ચિત કરવાનો પ્રયાસ કરો કે જ્યારે સુપરનેટન્ટ કૉલમમાંથી પસાર થાય ત્યારે તેમાં કોઈ વરસાદ ન થાય;સૂચનાઓ અનુસાર બફર પીડબ્લ્યુ સાથે શુદ્ધિકરણ કૉલમ ધોવાની ખાતરી કરો, અને આ પગલું અવગણી શકાય નહીં.

2. અશુદ્ધતા આયન પ્રદૂષણ.

વિશ્લેષણ: બફર WB વૉશ કૉલમ અવગણવામાં આવી હતી અથવા ફક્ત એક જ વાર ધોવાઇ હતી, પરિણામે શેષ આયનીય દૂષણ થયું હતું.

ભલામણ: શેષ આયનોને શક્ય તેટલું દૂર કરવા માટે સૂચનો અનુસાર બફર WB સાથે બે વાર ધોવાની ખાતરી કરો.

3. RNase દૂષણ.

વિશ્લેષણ: એક્સોજેનસ RNase બફરમાં ઉમેરવામાં આવે છે;બફર પીડબ્લ્યુમાં ખોટા ધોવાનું ઓપરેશન શેષ RNase માં પરિણમશે અને ડાઉનસ્ટ્રીમ RNA પ્રાયોગિક કામગીરીને અસર કરશે, જેમ કે ઇન વિટ્રો ટ્રાન્સક્રિપ્શન.

સૂચન: ફોરજીન શ્રેણીની ન્યુક્લીક એસિડ નિષ્કર્ષણ કિટ વધારાના RNase વગર RNA દૂર કરી શકે છે, અને પ્લાન્ટ DNA આઇસોલેશન કિટમાંના તમામ રીએજન્ટ્સને RNaseની જરૂર નથી;સૂચનાઓ અનુસાર બફર પીડબ્લ્યુ સાથે શુદ્ધિકરણ કૉલમ ધોવાની ખાતરી કરો, અને આ પગલું અવગણી શકાય નહીં.

4. ઇથેનોલ અવશેષો.

વિશ્લેષણ: બફર WB સાથે શુદ્ધિકરણ કૉલમ ધોવા પછી, કોઈ ખાલી ટ્યુબ સેન્ટ્રીફ્યુગેશન કરવામાં આવ્યું ન હતું.

ભલામણ: યોગ્ય ખાલી ટ્યુબ સેન્ટ્રીફ્યુગેશન માટે સૂચનાઓનું પાલન કરો.

સૂચના માર્ગદર્શિકા:

પ્લાન્ટ ડીએનએ આઇસોલેશન કીટ સૂચના માર્ગદર્શિકા