ડાયરેક્ટ RT-qPCR કિટ
વર્ણન
ડાયરેક્ટ RT-qPCR કિટ અલગથી પેકેજ્ડ RT-qPCR બફર અને ઉચ્ચ કાર્યક્ષમ એન્ઝાઇમ પ્રદાન કરે છેમિશ્રણ(Taq、M-MLV、RI), બેક-એન્ડ કિટ્સ અને સિસ્ટમ બનાવવા માટે તેને અનુકૂળ બનાવે છેગોઠવણ, સરળ ચકાસણીની અંદર.
વિશિષ્ટતાઓ
500T, 50,000T
કીટ ઘટકો
કીટ સમાવિષ્ટો (20 μL પ્રતિક્રિયા સિસ્ટમ) | IM-05111-01 | IM-05112-01 |
500 ટી | 50,000 ટી | |
ડાયરેક્ટ એન્ઝાઇમ મિશ્રણ | 500 μL×1 | 50 એમએલ×1 |
2× ડાયરેક્ટ RT-qPCR બફર | 1 એમએલ×5 | 500 એમએલ×1 |
સૂચના | 1 | 1 |
ઓપરેટિંગ પગલાં
રીએજન્ટ તૈયાર કરતા પહેલા, કીટમાંના તમામ રીએજન્ટ્સને ઓરડાના તાપમાને પીગળીને હળવા હાથે મિશ્રિત કરવા જોઈએ.
A: તૈયાર કરો of નમૂનો અને રીએજન્ટ
1. તૈયાર RNA ટેમ્પલેટ તૈયાર કરો (RNA ટેમ્પલેટ કાઢવા અને શુદ્ધ કરવા માટે ફોરજીન ટોટલ આરએનએ આઇસોલેશન કીટ સીરીઝ કીટનો ઉપયોગ કરવાની ભલામણ કરવામાં આવે છે) અથવા સેમ્પલ ક્રેકીંગ પ્રોડક્ટ (ફોરેજીન લિસિસ સિસ્ટમનો ઉપયોગ કરવાની ભલામણ કરવામાં આવે છે), ચોક્કસ પ્રાઇમર્સ (10 μM) અને અન્ય સંબંધિત ઉપભોક્તા, સાધન.
2. 2× ડાયરેક્ટ RT-qPCR બફર, RNase-ફ્રી ddH2O અને 20× ROX સંદર્ભ ડાય (જો તે's જરૂરી છે) બરફ સાથેના બૉક્સમાં, આ કુદરતી રીતે ઓગળે છે, અને ધીમેધીમે મિશ્રિત થાય છે.
B: તૈયાર કરો of RT-qPCR સિસ્ટમ
ટેબલ 1 : તૈયાર કરો of RT-qPCR sસિસ્ટમ
ઘટક | વોલ્યુમ | અંતિમ એકાગ્રતા |
2× ડાયરેક્ટ RT-qPCR બફર | 10 μL | 1× |
ડાયરેક્ટ એન્ઝાઇમ મિશ્રણ | 1μL | |
ફોરવર્ડ પ્રાઈમર(10 μM) | 0.8 μL | 50-900nM |
રિવર્સ પ્રાઈમર(10 μM) | 0.8 μL | 50-900nM |
ચકાસણી(4 μM) | 1μL | 200nM |
ઢાંચો(RNA અથવા Lysate) | X μL | |
20×ROX સંદર્ભ ડાય | - | 1* |
RNase-FreeddH2O | (6.4-X) μL | |
કુલ વોલ્યુમ | 20μL |
C: સેટ આ RT-qPCR પ્રતિક્રિયા કાર્યક્રમ
ટેબલ 2 : RT-qPCR પ્રતિક્રિયાon કાર્યક્રમ સેટિંગ (માટે ઉદાહરણ: બે-પગલું પદ્ધતિ)
પગલું | તાપમાન | સમય | સાયકલ | સામગ્રી | |
1 | 50℃ | 15 મિનિટ | 1* | 1 | રિવર્સ ટ્રાન્સક્રિપ્શન |
2 | 95℃ | 1 મિનિટ | 1 | પ્રિ-ડિનેચરેશન | |
3 | 95℃ | 10 સે | 40-45 | વિકૃતિકરણ | |
60℃ | 30 સેકન્ડ 2* | એનિલ/એક્સ્ટેંશન |
સંગ્રહ અને શેલ્ફ જીવન
-કીટ -20 પર સંગ્રહિત હોવી જોઈએ± 5℃.માન્યતા અવધિ 12 મહિના છે.
-પુનરાવર્તિત ફ્રીઝ-થો સાયકલ (<5 સાયકલ) ટાળો.